家蚕对苏云金芽孢杆菌毒素cry1ac的抗性遗传分析及基因的定位克隆

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1、学校代码：10289分类号：S881.2;S482.3+9密级：公开学号：122300012江苏科技大学硕士学位论文家蚕对苏云金芽孢杆菌毒素Cry1Ac的抗性遗传分析及基因的定位克隆研究生姓名易晓莉导师姓名李木旺申请学位类别理学硕士学位授予单位江苏科技大学学科专业生物化学与分子生物学论文提交日期2015年4月27日研究方向家蚕分子遗传学论文答辩日期2015年6月3日答辩委员会主席赵巧玲评阅人匿名评阅2015年6月4日分类号：S881.2;S482.3+9密级：公开学号：122300012理学硕士学位论文家蚕对苏云金芽孢杆菌毒素Cry1Ac的抗性

2、遗传分析及基因的定位克隆学生姓名易晓莉指导教师李木旺研究员江苏科技大学二O一五年六月AThesisSubmittedinFulfillmentoftheRequirementsFortheDegreeofMasterofScienceGeneticAnalysisonResistanceofBombyxmoriAgainstBacillusthuringiensisToxinCry1AcandPositionalCloningofResistanceGeneSubmittedbyYiXiaoliSupervisedbyLiMu-wangJian

3、gsuUniversityofScienceandTechnologyJune,2015江苏科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：年月日江苏科技大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文

4、的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：(1)保密□，在年解密后适用本授权书。(2)不保密□。学位论文作者签名：指导教师签名：年月日年月日摘要摘要Bt毒素是由苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)产生的一种伴孢晶体，对鞘翅目、鳞翅目、双翅目昆虫的幼虫具有特异的杀灭活性，而对人及其他动物无害。Bt不仅可以作为喷射的微生物杀虫刹，还可以通过转基因技术导入到植物中高效特异地杀灭

5、害虫，现已广泛应用于农林业害虫的防治。但随着Bt植物的大面积种植，对目标昆虫造成了极高的选择压力，使昆虫的抗药性不断增强，严重影响了该新型生物杀虫刹的使用效率。对昆虫抗性机制的研究是设计抗药性治理策略的基础，也是Bt植物持续应用于农林业生产中的根本保障。鳞翅目昆虫分布范围极广，且多数种类的幼虫为害各类栽培植物，是农林害虫最多的一个目。家蚕（Bombyxmori）是鳞翅目中的模式昆虫，具有极高的经济价值和丰富的种质资源，在生物学研究中发挥着重要作用。本研究以家蚕作为鳞翅目昆虫模型，研究其对微生物杀虫剂苏云金芽胞杆菌（Bt）毒素Cry1Ac的抗性水

6、平及遗传特性及抗性相关基因，从分子生物学的角度解释了家蚕对Bt毒素Cry1Ac产生抗性的机理，为鳞翅目害虫对Bt毒素的抗药性治理提供参考。其主要实验研究内容及结果如下：1.品种间的抵抗力差异将Cry1Ac毒素蛋白分别给供试的100个家蚕品种的2龄起蚕添食，调查幼虫死亡率并计算LC50值。调查结果显示家蚕不同品种对Cry1Ac毒素的抵抗力差异很大，呈现多态性。2.家蚕对Bt毒素Cry1Ac的抗性遗传分析选取抗性亲本ACR1、敏感性亲本Nistari进行单蛾区杂交，构建正、反交F1代、F2代，及BC1代群体，对各群体抗性调查统计结果显示，家蚕对Cr

7、y1Ac毒素的抗性属于单基因控制的隐性遗传。3.家蚕对Bt毒素Cry1Ac抗性基因的连锁定位分析以两个亲本及F1的基因组DNA为模板，在28个家蚕连锁群上筛选多态标记。将筛选出的多态标记在亲本及后代群体中进行基因型分析，结果显示在第15连锁群上筛选到的多态标记，在BC1F中的带型与表型一致，说明抗性基因与15号连锁群连锁。用BC1M个体的300个个体确定与家蚕对Bt毒素Cry1Ac抗性基因连锁的多态性标记顺序和遗传距离，绘制出家蚕抗Cry1Ac基因的分子连锁图，其遗传距离为2.0cM。4.家蚕对Bt毒素Cry1Ac抗性基因的初步预测及克隆测序根

8、据分子遗传连锁图的定位区域预测目的基因为BGIBMGA007792-93，根据I江苏科技大学理学硕士学位论文家蚕转运蛋白基因BGIBMGA007792