结肠癌间质的定量蛋白质组学研究

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1、万方数据中图分类号UDCR573．9610博士学位论文学校代码10533结肠癌间质的定量蛋白质组学研究IdentificationofStromaldif

2、ferentiaUyexpressed■●J●■●1■■J■●DrotelnSlntneC010nCarClnomaDVaUantltatlVeproteomics作者姓名：穆仪冰学科专业：临床医学研究方向：内科学学院(系、所)：指导教师：湘雅医院张桂英教授答辩委员会主席中南大学20l3年5月万方数据原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的

3、研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：彰兰叁鲨∑日期：皿年』月卫日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研

4、究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：秘导师签名彳锄期：丝年尘月姐万方数据中文摘要结肠癌间质的定量蛋白质组学研究研究背景：肿瘤微环境在肿瘤发生发展中的作用越来越受到重视，现已成为当今肿瘤研究的一个热门话题。结肠癌是世界常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率位居欧美发达国家的第三位【2】。近年来，由于环境的恶化和饮食结构的调整，我国结肠癌的发病率和死亡率逐年上升，严重危害了人民的生命和健康。从肿瘤微环境的角度出发，对比研究肿瘤间质细胞与正常组织间质细胞的差别，将有助于发现肿瘤微环境

5、所独有的特征，为寻找诊断标志物以及为开展间质靶向治疗打下坚实的基础。本研究采用激光捕获显微切割(1aserca砷lrelnicrodissection，LCM)技术从结肠癌组织与正常结肠黏膜组织中纯化肿瘤间质和正常间质，应用同位素标记相对和绝对定量(isobar．ctagsforrelatjveandabsoIutequantitatjon，iTRAQ)技术和二维液相色谱串联质谱(2DLC—MS／MS)比较结肠癌间质和正常结肠黏膜间质蛋白质表达谱的差异，从蛋白质水平探讨肿瘤间质在肿瘤发生发展中的作用。第一章LCM结合iTRAQ标

6、记定量蛋白组学筛选结肠癌间质相关蛋白质目的：筛查结肠癌间质和正常结肠粘膜间质差异表达蛋白质，对筛查出的差异表达蛋白质进行生物信息学分析。方法：①采用LCM技术纯化12对结肠癌间质及配对正常结肠黏膜间质；②汀RAQ．118和iⅡ认Q．121分别标记结肠癌间质及配对正常结肠黏膜间质多肽混合物后，2DLC—MS／MS鉴定结肠癌问质及配对正常结肠黏膜间质差异表达蛋白质；③采用DavidFunctionalAnnotation对差异表达蛋白质进行细胞成分、生物学途径和分子功能分析。④工ngenuityPathwayAnalysis(IPA

7、)对差异表达蛋白质进本课题受下列基金资助：(1)国家973(2011CB910704)项目(2)国家自然科学基金(No．81072038、81272798)(3)卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室开放课题行生物功能分析、经典通路分析以及构建差异表达蛋白质通路网络，万方数据研究这些差异表达蛋白质之间的相互关系及相关的信号通路。结果：①成功纯化结肠癌间质及正常结肠黏膜间质；②鉴定了70个差异表达蛋白，其中37个蛋白在结肠癌间质中高表达，33个蛋白在结肠癌间质中表达降低；③根据David功能分析软件对70个差异表达蛋白质进行分析。按照细胞

8、成分注释，这些差异表达蛋白质中的大多数属于细胞外基质蛋白(37．5％)、细胞器蛋白(28．6％)和细胞骨架蛋白(25％)。按照生物学功能分类，参与细胞外基质的占37．5％，其次为内质网应激和细胞骨架，而参与代谢、炎症反应等蛋白所占比例相对较少。按照分子功能注释，可以看出，91．8％的差异蛋白属于binding蛋白。参与酶调节活性的蛋白占仅1％。④IPA软件对70个差异表达蛋白质的分析结果：发现了51个经典通路、建立了4个确信度高的通路网络、筛选出56个网络相关蛋白质。经典通路分析显示了与肿瘤相关的信号通路，包括肌动蛋白细胞骨架信

9、号、ILK信号通路、14—3—3介导的信号通路、血管内皮生长因子信号通路、Wnt／B—catenin信号通路等。生物学功能分析所示，差异表达蛋白质相关的疾病中排在首位的是“肿瘤”，此外，与肿瘤发展相关的生物学功能是：炎性疾病、免疫性疾病、代谢疾病、细胞死亡、细胞