常染色体显性遗传先天性白内障一家系致病基因的研究

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1、郑州大学2005届硕士毕业论文常染色体显性遗传先天性白内障一家系致病基因研究常染色体显性遗传先天性自内障一家系致病基因研究硕士学位申请人：推荐导师：郑红郑州大学基础医学院天津医科大学张秀梅赵堪兴450052300070摘要实验目的：分析中国常染色体显性遗传性白内障(autosomaldominantcongenitalcataract，ADCC)FANS一家系的临床表型特征；利用连锁分析对与ADCC相关已知基因位点进行排除定位；通过单链构象多态性(singlestrandconformationpolymophism：SSCP)对导致先天性白内障的CX46(GJA3)、CX5

2、0(GJA8)基因进行突变筛查。研究方法：1．临床研究：ADCC家系审爨窍恚者熬癌交袋集，全瑟翁体捂检查与系统豹羧辩撩鲞，并对患者进行眼部的图像数码采集和处理。2．分子遗传学研究；2。1DNA提取：鼓家系残曼静艨瘫8一10越，采用美国罗氏(Roche—Biochemical)公司生产的DNA分离试剂盒进行基因组DNA提取。2．2基因逡锬分凝：选取分蠢在鑫状体蛋巍基因(CRYAACRYAB、CRYBAI／A3、CRYBBI、CRYBB2、CRYGC、CRYGD)、膜运输蟹白基因(MAF)、念珠状纤维蛋鑫基霾(BFSP2)、热休竟蛋鑫墓溺(HSF4)及MAF基阑上下约lO厘摩(c

3、entimorgan，cM)范围内的徽卫星标记；测用聚合酶链反应郑州大学2005届硕士毕业论文常染色体显性遗传先吞丝皂堕堕二窒叠塾堕茎垦婴窒(P01ymeraseChainReaction，PCR)对微卫星标记物进行PCR扩增，聚丙烯酰胺变性凝胶电泳和银染法确定单倍体型；利用两点法计算微卫星位点与致病基因之间的最大优势对数值(LODSCORE)。2．3采用PCR—DNA单链构象多态性(SingleStrandConformationPolymophism。SSCP)对导致先天性白内障的间隙连接蛋白GJA3和GJA8基因进行突变筛查。对可疑带型进行PCR扩增并进行序列分析。结果

4、：1．FANS家系呈垂直遗传，男女患病比例相同，无交叉遗传。2．FANS家系中患者白内障表型为粉尘状白内障(弥漫型、核型、板层等)。3．位于2、3、11、16、17、21、22号染色体上的11个先天性白内障致病基因附近的30个微卫星位点与致病基因均有重组现象，经两点法计算LOD值均为负值。4．通过SSCP分析，该家系先证者GJA3基因的外显子D段扩增产物出现异常条带，测序后证实在GJA3基因非编码区域存在两个CA碱基的缺失，而编码区未发现GJA3基因的突变，家系患者GJA8基因所有PCR扩增序列与正常人无明显差别。结论：1．先天性白内障FANS家系符合单基因常染色体显性遗传。

5、2．FANS家系的白内障临床表型为粉尘状白内障且具有不同的表现度。3．初步排除了晶状体蛋白基因、膜运输蛋白基因、念珠状纤维蛋白基因、热休克蛋白基因及MAF基因导致该家系白内障表型的可能。4．常染色体显性遗传先天性白内障具有遗传的异质性，致病基因的突变可能存在种族差异。5．先天性白内障FANS家系的表型可能是新的致病基因导致。关键词：先天性自内障；常染色体显性遗传；连镁分析；单链构象多态性郑州大学2005届硕士毕业论文常染色体显性遗传先天性白内障一家系致病基因研究ThestudyofcausativegenesinaChineseFamilywithautosomaldomin

6、antcongenitalcataractPostgraduatentorZhangxiumeiZhenghongZhaokanxingMedicineCollegeofZhengzhouUniversity450052TianjinMedeialUniversityAbstract：PURPOSE：TodescribetheclinicalcharacteristicsandinheritedpatterncataractassociatedinalargeChinesefamilywithcongenitalinheritedcataractandtoidentifyth

7、ecausativegeneandmutation．singlestrandconformationpolymophism《SSCP)analysiswasusedtoscreenGJA3andGJABgenes．M【ETHoDS：I．Investegationofclinical：AnautosomaldominantcataractwereidentifiedinmembersofalargefamilyofHanethnicitylivinginChina．Ophthalmologicalexam