三个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系致病基因鉴定

《三个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系致病基因鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、论文题目三个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系致病基因鉴定学科专业生物化学与分子生物学学号201521210107作者姓名彭春艳指导教师杨季云教授分类号密级注1UDC学位论文三个常染色体显性遗传视网膜色素变性家系致病基因鉴定（题名和副题名）彭春艳（作者姓名）指导教师杨季云教授电子科技大学成都（姓名、职称、单位名称）申请学位级别硕士学科专业生物化学与分子生物学提交论文日期2018.04论文答辩日期2018.05学位授予单位和日期电子科技大学2018年06月答辩委员会主席评阅人注1：注明《国际十进分类法UDC》的类号。IdentificationoftheCausativ

2、eGenesforThreeChineseFamilieswithAutosomalDominantRetinitisPigmentosaAMasterThesisSubmittedtoUniversityofElectronicScienceandTechnologyofChinaDiscipline:BiochemistryandMolecularBiologyAuthor:PengChunyanSupervisor:Prof.YangJiyunSchool:SchoolofMedicine摘要摘要背景：视网膜色素变性（retinitispigmentosa，RP

3、）是一种由于视网膜感光细胞受损而导致夜盲和进行性视野缺损的遗传性致盲眼底病。在单基因致盲性眼底病中，发病率居首位，是致盲的主要原因之一，在中国人群中发病率约为1/3500。RP尚无有效防治手段，迄今已鉴定出的70个致病基因，能解释约60%~70%的病例，尚有约40%的病例有待发现致病基因。对象与方法：本文以三个常染色体显性遗传RP家系作为研究对象，应用高通量测序技术进行RP致病基因鉴定，并对候选致病基因进行了初步的功能研究。主要研究内容分两部分：一、RP家系基因变异分析；二、候选致病基因的功能研究。研究方法包括:（1）对家系进行全基因外显子组测序，经公共dbSNP数据

4、库、千人基因组数据库、ExAC数据库比对过滤掉普遍变异，获得候选致病突变位点，进行家系验证。（2）构建候选致病基因突变质粒进行体外细胞学功能研究：构建ADAM15及PRPF31基因质粒（包括野生型和突变型），进行细胞转染，通过WB和ICC方法分析基因在细胞中的表达及定位。（3）对未能确认遗传病因的家系运用芯片检测进行全基因组连锁分析及全基因组低深度测序检测CNV。结果：（1）在RP家系1的致病基因研究中，①对先证者RP1-1样本进行全外显子组测序，在已知RP致病基因中筛选出5个候选致病突变位点。5个候选变异位点分别位于4个已知RP致病基因（ABCA4，TULP1，PR

5、PF31，PRPH2）；②Sanger测序家系验证结果显示PRPF31基因c.855+5G>A杂合突变符合基因型与表型共分离；③对先证者及家系正常表型个体外周血PRPF31基因mRNA进行RT-PCR扩增，RP1-1患者存在两条大小分别为1.5kb及1.1kb的PCR产物条带，正常表型对照仅见一条1.5kb的特异性PCR产物条带。1.5kb条带PCR产物测序结果为PRPF31基因（NM_015629）cDNA全长序列。1.1kb条带测序结果显示PRPF31基因（NM_015629）缺失了cDNA第996位至1406位中间共计409个核苷酸。该区域位于PRPF31基因外

6、显子第10、11、12、13及14区域。④在转染了PRPF31-pEGFP-N1野生型质粒的Cos7细胞中，PRPF31蛋白定位在Cos7细胞的细胞核；而转染了PRPF31-pEGFP-N1突变型质粒的Cos7细胞中，PRPF31蛋白表达量降低，主要分布于细胞浆中，细胞核仅有少量PRPF31蛋白。（2）在RP家系2的致病基因研究中，①通过全外显子组测序及数据分析得到7个候选致病突变位点；②Sanger测序家系验证结果显示ADAM15基因c.713G>A（p.R238H）杂合突变符合基因型与表型家系共分离，确定为候选致病基I摘要因。③与转染野生型ADAM15基因表达质粒

7、的293T细胞比较，转染ADAM15基因c.713G>A（p.R238H）突变表达质粒的293T细胞ADAM15蛋白表达量降低，具有统计学差异（P=0.0298）。④ICC实验显示，ADAM15突变型蛋白与野生型蛋白在Cos7细胞中均显示出在细胞膜、细胞浆及核膜周围均匀分布。（3）在RP家系3致病基因研究中，①运用全外显子组测序及数据分析后获得30个候选致病变异位点。②家系验证结果显示共计有7个变异位点符合基因型与表型家系共分离，7个候选基因为：ENO4，FBXO18，NPBWR2，SLC7A11，UNC79，ZGPAT，LAMA5。③采用Human