促肾上腺皮质激素释放因子对人胶质瘤u87mg细胞增殖及p53表达的相关性研究及意义

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2、，除了文中特别加以标注等内容，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：扎幼忉I弓年∑月乙、7日导师擗2珥目录IUlIIIIIlUIIIIIIIJUlaUfY2337472中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7研究论文促肾上腺皮激素释放因子对人胶质瘤U87MG细胞增殖及p53表达的相关性研究及意义前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯．．8日{J舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．22讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．24结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27综述促肾上腺皮质激素释放因子及P53在肿瘤方面的研究

4、进展⋯．．31致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49中文摘要促肾上腺皮质激素释放因子对人胶质瘤U87MG细胞增殖及p53表达的相关性研究及意义摘要背景：促肾上腺皮质激素释放因子(Corticotropin-releasingfactor，CI珂)是一种含有41个氨基酸的重要神经内分泌肽，属于CRF家族的一种。CRF协调应激状态下内分泌系统、自主神经、免疫系统、行为学等功能，并对心血管系统、胃肠道功能、皮肤及生殖等有调节作用，主要通过调节机体下丘脑．垂体．肾上腺轴(Hy

5、pothalamic-pituitary．adrenalaxis，HPA)来发挥作用。CRF在肿瘤增殖方面亦存在一定影响，可能与肿瘤血管的发生、肿瘤的生长和转移有关，以及在抗肿瘤增殖和保护神经元等方面有一定的作用。某些报道显示CRF对中枢神经系统肿瘤亦有一定的作用f22】。CRF受体在一些其它中枢及周围神经系统肿瘤也有表达，如受体CRFRl在髓母细胞瘤、神经节细胞瘤、神经母细胞瘤和一些脑膜瘤等有表达【l】。最近研究证实：在胶质瘤中存在CRFR受体的表达【16】，但目前国内外有关CRF对胶质瘤具体有如何影响及其作用途径均没有相关报道。目的：探索CRF对人胶质

6、瘤U87MG细胞株增殖的影响和在不同的浓度及作用时间下，CRF对U87MG细胞中p53基因的表达变化的影响。方法：lM丌法检测U87MG细胞增殖复苏U87MG细胞，传代后随即分为实验组和对照组，接种于96孔培养板中，每组均设置6个重复孔。将实验组分为三组分别加入含有不同浓度CRF的DM卧压培养基(浓度分别为10。1，10一，10‘9mol／L)，用MTT法分别检测CRF作用24h、48h、72h细胞的OD值，。判断在不同的浓度和时间条件下，CRF对U87MG细胞增殖的影响，并对结果进行统计学分析。2流式细胞技术检测细胞周期及凋亡将处于对数生长期的U87MG

7、细胞随即分为四组，每组设三个样本，分别加入含有CRF浓度分别为’10’1mol／L，10‘8mo儿，10‘9mol／L和不含CRF的DMEM培养基，培养48小时后用70％的冰乙醇固定过夜，应用中文摘要流式细胞技术(FlowCytometry,FCM)检测细胞的生长周期及细胞的凋亡情况，对结果应用统计学软件进行分析。3荧光定量PCR检测p53基因表达将复苏的U87MG细胞株，传代数次后随机分四组，每组每个时间点设三个样本，分别加入CRF浓度为10。1mol／L，10一mol／L，10。9mol／L和不含CRF的DMEM培养基，均接种在50mL培养瓶中继续培养

8、。分别在6h，12h，24h，48h四个时间点提取各组总RNA，应