促肾上腺皮质激素释放因子(crf)对人胶质瘤细胞u87增殖的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）对人胶质瘤细胞U87增殖的影响姓名：姬中庆申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：王立群201203中文摘要促肾上腺皮质激素释放因子对人胶质瘤细胞U87增殖的影响摘要研究背景：促肾上腺皮质激素释放因子(Corticotropin．releasingfactor，CRF)是一种含有41个氨基酸的下丘脑神经肽，主要是在应激状态下调节机体下丘脑．垂体．肾上腺轴(Hypothalamic．pituitary．adrenalaxis，HPA)的功能来发挥协调自主神经系统、内分泌、免疫系统、生理及行为学

2、的功能。另外，CRF对妊娠分娩、早产、皮肤、消化系统、心血管系统、生殖系统等具有调节作用。在人类的子宫内膜癌、卵巢癌、乳腺癌、皮肤癌、肝癌以及中枢神经系统肿瘤等均发现有CRF过度表达。动物实验模型表明CRF家族在肿瘤增殖、生长、转移等方面起到一定的作用。CRF家族神经肽在中枢神经系统肿瘤中的作用目前研究的还比较有限，特别是在胶质母细胞瘤方面，国内外都没有明确的报道。以前我们曾经采用免疫组化和RT-PCR的方法分别证实了CRF的受体CRFRl能够在胶质瘤细胞中表达。CRF作为肿瘤的一种推动因素，在胶质瘤的发生发展中一定存在着某种潜在作用。这将在进一步

3、的研究中逐步得到证实。目的：胶质瘤是颅内恶性度最高的肿瘤，由于其具有高侵袭性，对人体的健康危害极大，治疗效果也不理想，从生物分子学的角度对胶质瘤的发生发展进行研究已经成为热点。CRF作为一种促瘤生长因子在胶质瘤的发生发展中的作用还没有被明确的阐述。本实验的目的在于观察体外培养的人胶质瘤细胞U87在加入含有不同浓度的CRF后，U87胶质瘤细胞的增殖情况，从而探讨CRF对胶质瘤细胞U87细胞的生长起促进作用。通过此试验为进一步研究胶质瘤的发生及发展提供了新的内容。方法：在体外培养胶质瘤细胞U87，设立实验组和对照组，分别采用3种不同的方法检测CRF对该

4、细胞系增殖的影响。(1)在不同的培养时间(24小时、48小时、72小时)，利用倒置显微镜观察实验组和对照组胶质瘤细胞U87的生长状况，判断CRF是否在肿瘤的生长过程中起促进作用。中文摘要(2)在实验组细胞培养液中加入不同浓度的CRF，CRF的浓度分别为10一、10一、10～mol／L，通过四甲基偶氮唑蓝(3．(4，5dimethythiaz01．2．y1)一2，5一DiphenyltetrazoliumMTT)法检测不同的作用时间(24小时、48小时、72小时)细胞的吸光度值A，判断不同的CRF浓度和作用时间对胶质瘤细胞U87增殖的影响，对数据应用

5、SPSSl3．0统计软件进行分析。(3)利用酶组织化学法对细胞内线粒体进行染色，通过线粒体染色的变化来反映CRF在改变肿瘤细胞代谢方面的作用。结果：(1)通过倒置显微镜观察结果显示：实验组中加入10。7mol／L的CRF在分别培养24小时、48小时、72小时后与对照组相比，实验组的U87细胞生长状态更好，且贴壁生长的细胞数量有较明显的增加，细胞的形态具有多样性，细胞与细胞之间的粘连较好，细胞紧密地铺满于培养瓶底。(2)在CRF对胶质瘤细胞U87增殖的影响实验中我们发现：实验组中加入10一、10一、10‘7mol／L的CRY对胶质瘤细胞U87的生长均

6、具有促进增殖作用。利用重复测量设计资料的方差分析得出了球性检验结果，P=0．227>0．05，满足了协方差矩阵球对称条件，不需对结果校正。在CRF的同一浓度下，不同的作用时间，24小时、48小时、72小时之间CRF对U87细胞的增殖作用存在差别(F=65，尺O．05)，有统计学意义。在同一时间内，CRF不同浓度10一、10一、10‘7mol／L与对照组比较以及CRF10一、10一、10。7mol／L之间均存在差异(氏O．01)，有显著统计学意义。结果显示实验组与对照组相比较，实验组中加入浓度为lO一、10一、10‘7mol／L的CRF其细胞吸光值A

7、值随着CRF浓度的增加而增加，并呈现一定的剂量．效应关系。(3)酶组织化学染色显示，实验组较对照组在一定的药物浓度范围内随着实验组加入的CRF的浓度的不断增加，在作用24小时、48小时后细胞内的线粒体颜色明显加深，且分布较对照组广泛，细胞核分化也更为活跃。结论：CRF可以促进胶质瘤细胞U87的增殖，并且在一定的范围内呈现时间及剂量的依赖性。中文摘要关键词：CRF；胶质瘤U87细胞株；表达；细胞增殖英文摘要EffectofCorticotropinreleasingfactor(CRF)onhumangliomacelllineU87prolifer

8、ationABSTRACTBackground：Corticotropin—releasingfactor(CRF)isa