stat3反义核苷酸对脑胶质瘤u87细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制

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1、实用医学杂志2013年第29卷第23期STAT3反义核苷酸对脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制方大钊王伟杰董楠付宪华丁涟沭摘要目的：探讨转染信号转导和转录激活因子3(STAT3)反义核苷酸对人脑胶质瘤U87细胞增殖、凋亡、周期的影响及其作用机制。方法：应用脂质体转染技术瞬时转染STAT3寡聚核苷酸反义和无义序列至U87细胞．通过CCK一8法、流式细胞仪(FCM)检测转染后各组细胞增殖、凋亡及周期，WesternBlot检测转染后凋亡相关蛋白Bax、Bcl一2及周期调控蛋白c—Myc的表达结果：CCK一8法检测显示反义组的细胞480nin处

2、吸光度(O．64±0．17)较空白组(1．33±0．16)降低(t=6．772，P<0．01)，而凋亡率[(44．17±3．35)％l较空白组『(14．63±3．55)％]升高(t=12．86，P<0．01)；通过DNA倍体分析得出，反义组S期细胞比例『(40．63±2．71)％]高于空白组『(21．38±1．93)％，t=10．02，P<0．05]；蛋白质水平检测发现反义组Bax表达上调而Bcl一2和c—Myc表达下调．各指标在无义组与空白组之间无明显差异。结论：STAT3反义核苷酸是通过调节Bax、Bel一2及c—Myc的表达抑制U87细胞增殖并

3、诱导其凋亡。关键词脑肿瘤；胶质瘤：STAT3反义核苷酸；增殖；凋亡胶质瘤是成人颅内最常见的恶性肿瘤，具有恶液、胰蛋白酶购白Hyclone公司；Lipofectamine2000性程度高、易复发、预后差等临床特点。近年来，显购自invitrogen公司：细胞凋亡和周期检测试剂盒微外科治疗、立体定向放射治疗⋯和光动力治疗[2I购自南京凯基生物科技公司；CCK一8购自日本同等的发展改善了脑胶质瘤的预后。但其临床疗效仁化学研究所；Bcl2、Bax、c．Myc一抗购买自Santa仍不尽理想。信号转导和转录激活因子(STAT)通erllZ公司；GAPDH内参、二

4、抗(兔抗鼠／山羊抗兔)路是一条众多因子参与调控并广泛作用于肿瘤细购自bioworld公司。胞增殖、凋亡等生物学过程的重要信号通路[3-4]。1．2研究方法STAT3作为STAT家族的重要成员，经激活转变为1．2．1细胞培养U87细胞培养于含10％胎牛血p-STAT3后，通过抑制凋亡或诱导细胞增殖参与肿清的DMEM培养基，置于37℃、5％CO细胞培养瘤的发生发展过程[，STAT3异常激活与胃癌[、箱中孵育，取对数生长期细胞进行实验。乳腺癌、前列腺癌l8l等多种恶性肿瘤进展及预后1．2．2实验分组实验分为反义组、无义组和空有着密切的关系。研究发现，胶质瘤

5、细胞中也存在白组反义组细胞转染STAT3一antisense，无义组细STAT3和p-STAT3的表达，本实验通过STAT3反胞转染STAT3一Scramble，而空白组细胞不转染任何义核苷酸转染胶质瘤U87细胞，研究阻断STAT3外源核苷酸。信号通路对胶质瘤细胞生长的影响及其作用1．2-3寡聚核苷酸体外转染U87细胞对数期细胞机制。接种于l2孔板，调整密度为4X105／，孑L。Lipofectamine1材料与方法2000转染试剂与相应寡聚核苷酸按照1：1混合，1．1材料人胶质瘤细胞株U87购自中科院上空白组仅加入等量的Lipofectamine2

6、000转染试海生命科学院研究院；STAT3寡聚核苷酸由上剂，室温孵育15rain后，加入到孔板中，6h后换液，海吉玛公司设计合成，STAT3反义序列(STAT3一继续培养48h。antisense)：5．GCTCCAGCATCTGCTTC．3；STAT3无1．2．4WesternBlot各组细胞转染后提取总蛋白，义序列(STAT3一Scramble)：5GAAGCAGCAGATGCBCA法测定蛋白浓度，取各组细胞蛋白约30g，TGGA一3。胎牛血清购自Gibco公司，DMEM培养电泳分离后湿转至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜，抗Bax、抗Bc1．2、抗c

7、—Myc等检测相应蛋白。GAPDH作为内对照。doi：10．3969／j．issn．1006-5725．2013．23．0191．2．5细胞增殖与毒性检测试剂(CellCounting作者单位：223300江苏省淮安市，南京医科大学附属淮安第Kit．8，CCK．8)分析细胞增殖情况转染成功后，每一人民医院神经外科通信作者：丁涟沭E，mail：dlshu@163．corn孑L加入100的CCK．8溶液，继续培养4h后取实用医学杂志2013年第29卷第23期表1转染STAT3寡聚核苷酸对U87细胞周期的影响表达上调，Bcl一2表达下调．说明STAT3．a

8、ntisense对±s．％U87细胞凋亡的促进作用。我们认为这一过程很可能是通过直接调节Bax和Bc1．2表