脂质体介导htert反义寡核苷酸对hl60细胞增殖及凋亡的影响论文

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1、脂质体介导hTERT反义寡核苷酸对HL60细胞增殖及凋亡的影响论文关则兵潘学谊蔡小燕【摘要】目的研究经脂质体介导转染端粒酶逆转录酶（hTERT）反义寡核苷酸(ASODN)对HL60细胞增殖、凋亡的影响。方法运用四唑盐比色（MTT）法检测HL60细胞的增殖、AnnexinVFITC/PI双标记法细胞早期凋亡流式检测法检测HL60细胞的凋亡。结果hTERTASODN组（终浓度10μmol/L）、脂质体介导hTERTASODN组(终浓度0.5μmol/L)均能抑制HL60细胞增殖，诱导HL60细胞凋亡，两组比较差异无显著性。各ASODN组对HL60的抑制作用及诱导凋亡作用均弱

2、于阿糖胞苷（终浓度10μmol/L）（P0.01）。结论脂质体的介导增强了hTERTAS0DN抑制HL60细胞增殖及诱导凋亡的作用效果。脂质体介导hTERTASODN有可能成为化疗外治疗急性白血病的有益补充。【关键词】脂质体；端粒酶逆转录酶；反义寡核苷酸；HL60细胞；凋亡Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofliposomemediatedhTERTASODNontheproliferationandapoptosisofHL60cells.MethodsTodetectinhibitionrateofHL60multipli

3、cationbyMTTanddetectapoptosisbyAnnexinVFITC/PIdoublelabelmethodol/L）andliposomemediatedhTERTASODN(0.5μmol/L)allhadtheinhibitoryeffectsonproliferationandinducingapoptosisofHL60cells,buttheree.LiposomemediatedhTERTASODNcouldbeanadditionalmethodtotreatacuteleukemiabesideschemotherapy.liposome；t

4、elomerasereversetranscriptase；antisenseoligodeoxynKeye；hTERT；HL60cell；ASODN；apoptosis恶性肿瘤的形成与端粒酶活性的升高有关［1］，白血病及其细胞株也存在着端粒酶活性的高表达［2］。由于端粒酶逆转录酶（hTERT）是调节端粒酶活性高低的限速决定因子［3］，故利用hTERTmRNA的反义寡核苷酸(ASODN)抑制端粒酶活性有望成为治疗白血病的手段［4］。但在将外源基因引入靶细胞的过程中，很容易被体内的核酸酶降解，失去治疗作用。为探讨经脂质体介导后，能否提高hTERTASODN抑制HL60细胞增殖及诱导凋

5、亡的作用.freelL青霉素，100μg/mL链霉素的RPMI1640培养液，在37℃、5％CO2饱和湿度条件的培养箱中培养，2～3d常规传代换液培养，台盼蓝染色计数，维持细胞活力在90%以上。取对数生长期细胞进行后续实验。1.3反义核酸脂质体复合物的制备及转染hTERTASODN加灭菌三蒸水充分溶解，浓度配制为100μmol/L，-20℃冰箱保存备用。按照脂质体说明书，取100μmol/LASODN溶液5μL(3.33μg)加入不含血清及抗生素的RPMI1640培养液95μL，为A液；取阳离子脂质体Lipofectin20μL(20μg)加入不含血清及抗生素的RPMI1640

6、80μL，为B液。A、B液分置室温30min后，轻柔混匀，再置室温15min，即为反义核酸脂质体复合物。取HL60细胞，5×105/孔。每孔加不含血清及抗生素的RPMI1640培养800μL，加入反义核酸脂质体复合物200μL（反义核酸终浓度为0.5μmol/L），放入37℃CO2孵箱中转染6h后进行后续实验。1.4分组及加药方法ASODN组：取HL60细胞1×105，加入含10%胎牛血清的RPMI1640培养液990μL、加入的1mmol/LASODN溶液10μL（使其终浓度为10μmol/L［4］），培养72h；脂质体介导ASODN组：取转染后HL60细胞1×105，

7、改换含10%胎牛血清的RPMI1640培养液1000μL，继续培养72h；阿糖胞苷组：取HL60细胞1×105，加入含10%胎牛血清的RPMI1640培养液990μL、加入阿糖胞苷溶液10μL（使其终浓度为10μmol/L，参照文献报道的半数抑制浓度［5］），培养72h；空白对照组（常规培养体系）：取HL60细胞1×105，加入含10%胎牛血清的RPMI1640培养液1000μL培养72h。分别培养24h、48h、72h收集(每组做3