脂质体转染反义脱氧寡核苷酸对k562细胞α珠蛋白基因表达及细胞增殖的影响论文

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1、脂质体转染反义脱氧寡核苷酸对K562细胞α珠蛋白基因表达及细胞增殖的影响论文【摘要】本研究查明脂质体转染反义脱氧寡核苷酸（ASON）对K562细胞α珠蛋白基因表达的抑制作用及对细胞增殖的影响，探讨基因调控治疗β地中海贫血的新思路。设计合成靶向α珠蛋白基因的ASON，并与正义寡核苷酸（SON）和空白对照进行比较。采用脂质体转染技术将ASON、SON与K562细胞共同培养，用荧光显微术、流式细胞术检测脂质体转染效率，用实时荧光定量RTPCR法检测K562细胞中α珠蛋白基因表达情况，并通过CellCountingKit8（CCK8）法观察脂质体转染ASON技术对细胞增殖的影

2、响。结果表明：脂质体转染效率在ASON作用24h达到最高，脂质体转染ASON组的α珠蛋白基因表达水平显著低于SON和空白对照组（p0.01），并对细胞的增殖有明显的抑制作用.freelalTransfectionofAntisenseOligodeoxynucleotideonAlphaglobinGeneExpressionandProliferationofK562CellsAbstractTheobjectiveofstudyaltransfectionofantisenseoligodeoxynucleotide(ASON)onalphaglobingeneex

3、pressionandproliferationofK562cells,toexploretheneia.TargetedASONofalphaglobinaltransfection,ASON,SONicroscopyandfloetry(FCM),thealphaglobingeneexpressionofK562easuredbyrealtimePCR,andtheproliferationofK562inedbyCellCountKit8assay.Theresultsindicatedthatthehighestefficiencyaltransfecti

4、on,thegeneexpressionlevelofalphaglobininASONgroupeananner.ItisconcludedthattheliposomaltransfectionofASONinhibitsthealphaglobingeneexpressionofK562cells,aybetheneia.Keyetransfection;antisenseoligodeoxynucleotide;K562cell;cellproliferation;βthalassemiaJExpHematol2007;15(5):1065-1069β地中海贫

5、血是一种对人类健康危害严重的遗传性溶血性贫血病，其病理特征是β珠蛋白基因发生突变，引起β珠蛋白链合成减少，造成α与非α珠蛋白链的比例失衡，α珠蛋白链过剩，在红细胞内形成包涵体，导致骨髓无效红细胞生成和溶血。理论上基因治疗是最理想的方法，因而近20年来基因调控成为倍受人们关注的β地中海贫血治疗方法之一。目前针对β地中海贫血的基因调控治疗研究较多的停留在导入正常的β珠蛋白基因，或对剪接缺陷突变的β珠蛋白链修复上，使之恢复正常剪接，产生正常的β珠蛋白链。与其他研究不同之处在于，我们设计靶向α珠蛋白基因的ASON，通过基因调控技术，从分子水平封闭部分α珠蛋白基因，以期待能抑制相应的

6、α珠蛋白链合成，改善α与非α珠蛋白链的比例失衡状况，为探讨基因调控治疗β地中海贫血寻找新的靶点。我们以K562细胞作为实验对象，用脂质体作为转染ASON的载体以增加细胞的吸收度及提高导入率，观察其对K562细胞α珠蛋白基因表达的抑制作用及对细胞增殖的影响。K562细胞的培养及传代将K562细胞（购自中国科学院上海细胞生物学研究所）接种于含10%胎牛血清的RPMI1640(GibcoBRL公司产品)培养液中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养，细胞生长良好，隔天换液并传代1次，细胞处于对数生长期成活率95%。寡核苷酸（全硫代）的合成和纯化从GenBank（序列号为

7、：BC005931）获得α珠蛋白基因mRNA全序列，利用RNAstructure4.2设计ASON，并用前期预实验进行分析和筛选；获得最佳ASON序列：5′CAGCACCATGGTGGGTTCTC3′，SON序列：5′GTCTTGTCGGCAGGAGAC3′。全硫代反义脱氧寡核苷酸由上海英骏生物技术有限公司合成和纯化，并在寡核苷酸3′端带入异硫氰酸荧光素（FITC），以便检测脂质体转染效率。寡核苷酸的脂质体转染按照脂质体（Oligofectamine，Invitrogen，Cat.No.12252011）