干扰素α2b对hl60细胞抑增殖与促凋亡的影响论文

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1、干扰素α2b对HL60细胞抑增殖与促凋亡的影响论文【摘要】为了研究干扰素α2b（IFNα2b）对HL60细胞增殖与凋亡的影响，采用瑞氏染色观察HL60细胞的形态变化，吖啶橙/溴化乙锭双染色观察细胞凋亡，通过CD13测定观察细胞膜抗原表达及成熟分化，MTT实验观察增殖活性。结果显示：加入IFNα2b48小时后，HL60细胞凋亡率升高，增殖活性下降，而且随着IFNα2b浓度的升高.freelorphologicchangesbromide(EB)stainingrespectively.Inhibitionofproliferation

2、munoassay.Theresultsshoentionedtethodslinculturefor48hours.MorphologyandcountofCD13+cellslinculturefor48hours.ItisconcludedthatIFNα2bcanenhancetheapoptosisofHL60cells,inhibittheirproliferation,promotetheirmaturationanddifferentiation.Keya公司产品。细胞培养HL60白血病细胞在含10%新生牛血清的RPMI1640

3、培养液中，于5%CO2、37℃条件下悬浮培养,2-3天传代1次。实验分组取对数生长期的HL60细胞，调整细胞浓度为1×106/ml，0.1%台盼蓝鉴定活性在98%以上。实验分为对照组（A）和实验组（B、C、D、E、F），在24孔培养板中，每孔加入1ml细胞悬液。每组设4个复孔。各实验组中再加入IFNα2b溶液50μl，终浓度分别为500、1000、2000、5000、10000U/ml，对照组加入等量生理盐水。于37℃、5%CO2条件下培养48小时。细胞增殖实验每孔取细胞悬液200μl加入96孔板，每孔加入MTT溶液20μl，37℃孵育4小时。吸

4、去上清液，每孔加入150μl二甲亚砜（DMSO），振荡10分钟，570nm用酶标仪测定各孔的吸光度。细胞形态及凋亡检测在普通光学显微镜下观察各组细胞形态的变化。另取各组细胞分别加入吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）混合染液，混匀2分钟后滴在载玻片上，加盖玻片后在普通光学显微镜下计数200个细胞，在荧光显微镜下计数凋亡细胞，计算凋亡率。对凋亡细胞的结果判断为：活HL60细胞核染色质呈均匀一致的绿色，呈正常结构；早期凋亡细胞核染色质着绿色，呈固缩状；晚期凋亡细胞核染色质着橘红色，呈固缩状；死亡细胞核染色质着橘红色，呈正常结构。CD13蛋白表达的测定每孔取细

5、胞悬液50μl加入鼠抗人CD13单克隆抗体50μl，混匀。于4℃孵育40分钟。用PBS洗2次，加入FITC标记的兔抗鼠单克隆抗体50μl，混匀。于4℃孵育40分钟。用PBS洗2次，留沉淀细胞和10-20μl上清液，混匀。吸取1滴细胞悬液滴于载玻片上，加盖玻片。用普通投射光计数视野中的细胞数，然后用紫外光计数同视野中荧光阳性的细胞，共计数200个细胞，计算阳性细胞的百分数。统计学处理利用SPSS12.0统计软件进行统计学分析，所有数据用±SD表示。组内采用方差分析，组间采用t检验。结果IFNα2b对HL60细胞增殖活性的影响不同浓度的IFNα2b

6、在48小时内对HL60细胞的活力无明显影响（台盼蓝染色细胞活力95%以上）。MTT法检测显示，IFNα2b对HL60细胞生长具有抑制作用，随着浓度升高，对HL60细胞的抑制作用加强，OD值降低，在浓度为1000U/ml时开始产生明显抑制作用，浓度为10000U/ml时抑制作用最明显（附表）。IFNα2b对HL60细胞形态学及凋亡的影响当IFNα2b浓度为1000U/ml时，细胞开始出现形态的变化，当浓度≥2000U/ml时，细胞核明显缩小，核仁消失，胞浆由少变多，核浆比缩小，核偏于一侧，有凹陷，分叶明显。IFNα2b浓度为500U/m

7、l时及对照组细胞形态未见变化。当IFNα2b浓度为500U/ml时，HL60细胞凋亡率为(51.4±1.8)%，以早期凋亡细胞为主；随着IFNα2b浓度的升高，HL60细胞的凋亡率逐渐升高，以F组升高最明显，高达(77.6±3.4)%，以晚期凋亡细胞为主；而对照组HL60细胞凋亡率仅为（18.5±2.1)%（附表）。HL60细胞CD13蛋白的表达对照组HL60细胞CD13阳性表达率为(65.8±4.2)%，随着IFNα2b浓度的升高，实验组的CD13阳性细胞表达率逐渐降低，以F组降低最明显，为(29.8±2.5)%，明显低于对照组和其

8、他实验组（附表）。讨论干扰素（IFN）是一类具有广泛生物活性的蛋白质，具有调节机体免疫功能、抗病毒、抗肿瘤等