缢蛏C型凝集素基因ScCTL-1和ScCTL-2的克隆鉴定与免疫功能研究.pdf

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1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生学号：M150107157上海海洋大学硕士学位论文题目：缢蛏C型凝集素基因ScCTL-1和ScCTL-2的克隆鉴定与免疫功能研究英文题目：CloningandimmuneactivitystudyofC-typelectingenesinSinonovaculaconstricta专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：水产动物种质资源与种苗工程姓名：蓝天一指导教师：李家乐教授、牛东红副教授二O一八年六月上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所

2、呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以

3、采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注王群华东师范大学教授主席汪亚平中科院水生生物研究所研究员委员邹钧上海海洋大学教授委员竹攸汀上海海洋大学博士秘书徐晓雁上海海洋大学讲师秘书答辩地点水产与生命学院D101答辩日期2018.05.30缢蛏C型凝集素基因ScCTL-1和ScCTL-2的克隆鉴定与免疫功能研究摘要缢蛏（Sinonovaculaconstricta）是我国

4、重要的海水养殖贝类之一。近年来，随着缢蛏高密度养殖的发展和养殖环境的不断恶化，细菌性疾病成为了缢蛏养殖中的一大问题。研究表明，C型凝集素（C-typelectin）作为一种模式识别受体（Patternrecognitionreceptor,PRR），广泛参与贝类的免疫防御机制，在贝类免疫中占据着重要的地位。但目前为止，在缢蛏中尚少有关于C型凝集素研究的报道。本文克隆了2个缢蛏C型凝集素基因，并对它们的mRNA表达模式以及重组蛋白的免疫功能进行了研究。1．从之前构建的缢蛏转录组文库中获得了2个C型凝集素基因ScCTL-1和S

5、cCTL-2的序列片段，使用RACE-PCR技术克隆得到它们的cDNA全长序列。序列分析结果表明，ScCTL-1基因cDNA全长2370bp，包含一个长度为1899bp的开放阅读框（Openreadingframe，ORF），编码632个氨基酸，蛋白相对分子量约为70.22kDa；ScCTL-2基因cDNA全长2194bp，包含一个长度为1893bp的ORF，编码630个氨基酸，蛋白相对分子量约为70.38kDa。结构域预测结果表明，ScCTL-1具有1个N端信号肽、4个C型凝集素结构域（C-typelectindomai

6、n，CTLD）以及1个C端跨膜区；ScCTL-2具有1个N端跨膜区以及4个CTLD。二者均含有4个CTLD，在序列结构上具有一定的相似性。2个C型凝集素的所有CTLD均含有6个完全保守的半胱氨酸，属于“长型”CTLD。在ScCTL-1靠近N端的第3个CTLD以及ScCTL-2靠近N端的第3、4个CTLD中，糖结合作用位点的氨基酸组成与脊椎动物甘露糖结合专一性CTLD完全一致，预示着这3个CTLD的糖结合专一性可能为甘露糖型。2．通过荧光定量PCR检测了缢蛏C型凝集素基因ScCTL-1和ScCTL-2在健康缢蛏7种组织以及受

7、金黄色葡萄球菌和鳗弧菌感染缢蛏血细胞中的表达情况。分析结果表明，ScCTL-1和ScCTL-2在健康缢蛏肝胰腺中的表达量均显著高于其它组织（P<0.05）；ScCTL-2在健康缢蛏鳃中的表达量显著高于较除肝胰腺外的其余5种组织（P<0.05）。ScCTL-1和ScCTL-2在健康缢蛏各组织中表达量的分布情况预示着二者均可能与缢蛏免疫相关。在受金黄色葡萄球菌与鳗弧菌感染的缢蛏血细胞内，ScCTL-1和ScCTL-2的表达量均出现上调的现象。ScCTL-1在缢蛏I感染金黄色葡萄球菌后4h、24h的表达量显著高于攻毒前（P<0.

8、05）；在缢蛏感染鳗弧菌后4h、12h的表达量显著高于攻毒前（P<0.05）；感染两种细菌后的表达量变化均出现二次上调的过程。ScCTL-2在缢蛏感染金黄色葡萄球菌后4-24h的表达量均显著高于攻毒前（P<0.05），并且表现出逐渐上升的趋势；在缢蛏感染鳗弧菌后8h、12h的表达量显著高于攻毒前（P<0