缢蛏EGFR基因表达特征及促生长功能初探.pdf

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1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生号：M150101077上海海洋大学硕士学位论文题目：缢蛏EGFR基因表达特征及促生长功能初探ResearchonthecharacterizationofEGFRgeneandgrowth英文题目：promotingeffectinSinonovaculaconstricta专业：水产养殖研究方向：水产动物种质资源与种苗工程姓名：卫侃韵指导教师：李家乐教授、牛东红教授二0一八年四月上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的

2、学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描

3、等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩地点答辩日期上海海洋大学硕士学位论文缢蛏EGFR基因表达特征及促生长功能初探摘要缢蛏（Sinonovaculaconstricta）是我国重要的经济贝类之一，探索生长相关基因功能具有重要的生产实践意义。本实验从缢蛏转录组文库中筛选获得一条表皮生长因子受体的部分序列，通过RACE法获得了EGFR(epiderm

4、algrowthfactorreceptor,EGFR)基因的cDNA全长序列，并发现一处可变剪切现象。本文分析了两个亚型时空表达的特征，对比了其在体外对细胞增殖的能力，并初步探索了缢蛏EGFR基因在个体生长过程中的功能。1.缢蛏EGFR基因的克隆及基因结构分析经Race法得到缢蛏EGFR基因的cDNA全长片段，命名为Sc-EGFR，同时在cDNA片段中发现了两个亚型，分别命名为Sc-EGFR-1a(登录号：MF958947)和Sc-EGFR-1b(登录号：MF958948)。序列分析表明，Sc-EGFR-1a基因的全长为5,962bp

5、，开放阅读框可编码1,527个氨基酸，5’端为1,152bp，3’端为226bp，理论分子量是176.33kDa，等电点为5.69。其中Sc-EGFR-1b基因的理论分子量是168.37kDa，等电点为5.70。Sc-EGFR-1a和Sc-EGFR-1b基因的功能结构域一致，包括胞外区、跨膜区和胞内区。在C端尾处，Sc-EGFR-1a比Sc-EGFR-1b多了27个氨基酸，改变了磷酸化位点，可能影响下游激酶活性。2.缢蛏Sc-EGFR-1a和Sc-EGFR-1b基因的表达分析采用荧光定量PCR技术检测了Sc-EGFR-1a和Sc-EGF

6、R-1b基因在不同的发育时期和组织间的表达谱。发现突变体在受精卵时期就存在，并且在幼虫发育的中后期，表达呈上升趋势。在组织间，Sc-EGFR-1a和Sc-EGFR-1b基因在组织间表达广泛并在水管中的表达量最高。Sc-EGFR-1a基因在斧足、肠和肝脏中的表达量较高，而Sc-EGFR-1b基因在肝脏、鳃和血中有较高表达。3.缢蛏Sc-EGFR-1a和Sc-EGFR-1b基因对细胞增殖能力的初探在体外实验中，通过增殖细胞核抗原含量(PCNA)和3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法，发现Sc-EGFR-1a和

7、Sc-EGFR-1b对细胞增殖能力可能不同。与比对照组相比，转染Sc-EGFR-1a细胞中PCNA的表达量显著高，而转染Sc-EGFR-1a细胞中PCNA的表达量与对照组差异不显著。同时，通过MTT法检测转染后细胞数量的变化趋势，也发现转染Sc-EGFR-1a后细胞的增殖量比对照组多。I上海海洋大学硕士学位论文4.体内干扰缢蛏EGFR基因对个体生长影响的初探在体内RNA干扰实验中，通过荧光定量技术检测EGFR基因干扰效果，发现与对照组相比，斧足内基因的表达量在第2天开始下降，并在第5天至第15天内显著下降。表明，Sc-EGFRdsRNA

8、在15天内能有效干扰基因的表达量。干扰组缢蛏壳长积累的速度比对照组慢，且存活情况也低于对照组。5.缢蛏EGFR基因单核苷酸多态性(SingleNucleotidePolymorphism,SNP)与生长性状