青鳉(Oryzias latipes)类胰岛素生长因子Ⅰ型受体(igf1ra&igf1rb)的克隆和表达研究

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1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生学号：M150150328上海海洋大学硕士学位论文青鳉（Oryziaslatipes）类胰岛素生长因子Ⅰ型受体（igf1ra题目：&igf1rb）的克隆和表达研究Thecloningandexpressionpatternanalysisofigf1raand英文题目：igf1rbinmedaka专业：渔业研究方向：鱼类性腺发育姓名：袁灿灿指导导师：李名友教授二O一八年四月I上海海洋大学硕士学位论文学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨

2、学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名_____________日期:年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本

3、学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□本学位论文属于，在年解密后适用本版权书。不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日II上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注中国水产科学研究曾令兵研究员主席院长江水产研究所杜昌升同济大学教授委员孙建和上海交通大学教授委员严亚贤上海交通大学教授委员复旦大学附属眼耳颜标研究员委员鼻喉科医院季策上海海洋大学博士生秘书水产与生命学院答

4、辩地点答辩日期2018.5.29D101病原库会议室III上海海洋大学硕士学位论文青鳉（Oryziaslatipes）类胰岛素生长因子Ⅰ型受体（igf1ra&igf1rb）的克隆和表达研究摘要青鳉是一种小型淡水鱼，它具有胚胎透明、体型小、繁殖快等一系列优点。青鳉是研究脊椎动物发育生物学和繁殖生物学的良好模式生物，并且它是第一个已经鉴定了雄性性别决定基因的非哺乳脊椎动物。青鳉中已经获得了多种转基因鱼，而这些基因都是在性腺特异表达的，为研究生殖和性腺发育相关基因的功能奠定了基础。我们已经研究了许多调控生殖发

5、育的基因，比如：敲降青鳉piwi或vasa基因会导致原始生殖细胞（primordialgermcells,PGCs）迁移异常；而敲降dazl或dnd基因影响PGCs形成。此外，生殖细胞的移植技术已在青鳉中建立。因此，青鳉是一个研究鱼类性腺发育和繁殖的有趣生物。类胰岛素生长因子（IGFs）信号系统在动物的生长发育、新陈代谢以及胚胎干细胞的自我更新等方面具有关键作用。IGFs信号系统主要包括IGF配体（IGF1、IGF2和IGF3）、IGF受体（IGF1R和IGF2R）以及IGF结合蛋白（IGFBP）。许多

6、研究都阐述了IGFs在哺乳动物的生长、发育、代谢以及肿瘤发生中的作用。但是，IGFs在鱼类性腺发育以及鱼类繁殖中的研究较少，尤其是青鳉中的研究更少。本研究首次克隆了青鳉igf1ra和igf1rb两个igf1r基因亚型，这与哺乳动物中igf1r只有一个亚型完全不同，并且分析了其生物信息学的信息，包括序列同源性比对、系统发育树分析以及染色体同线性分析。此外，我们还利用RT-PCR、化学原位杂交、荧光双色原位杂交以及整体胚胎原位杂交等技术手段探究了igf1ra和igf1rb在青鳉性腺和胚胎中的mRNA表达以及

7、亚细胞定位。本研究首次获得了igf1ra整个开放阅读框（ORF）全长4197nt，编码1398个氨基酸；igf1rb整个ORF全长4224nt，编码1407个氨基酸。生物信息学分析发现青鳉IGF1R是人类IGF1R的同系物，并且IGF1R在进化上相对保守。通过RT-PCR分析发现青鳉igf1ramRNA和igf1rbmRNA在所检测的所有组织以及所有胚胎中均有表达。此外，化学原位杂交以及荧光双色原位杂交分析结果发现：在青鳉卵巢中，igf1ramRNA和igf1rbmRNA在I-IV期卵母细胞的细胞质中均

8、有表达。此外，igf1rbmRNA还在许多体细胞中表达，比如整个卵子发育过程中的膜细胞和卵子发育后期的卵巢颗粒细胞；但是，igf1ramRNA在体细胞中并没有发现。在青鳉IV上海海洋大学硕士学位论文精巢中，igf1ramRNA和igf1rbmRNA呈现两种完全不同的表达模式。Igf1ramRNA主要在体细胞中表达，比如支持细胞和睾丸间质细胞。此外，igf1ramRNA还在精母细胞、精细胞和精子中表达，而在精原细胞中并没有明显的表达。然而，i