青鳉(Oryzias latipes)性腺miR-202-5p和miR-26a靶基因的验证及表达分析.pdf

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1、上海海洋大学硕士学位论文2018年4月学校代码：10264研究生学号：M150150325上海海洋大学硕士学位论文青鳉（Oryziaslatipes）性腺miR-202-5p和miR-26a靶基题目：因的验证及表达分析TargetgenesvalidationandexpressionanalysisofmiR-202-英文题目：5p&miR-26ainmedakagonads专业：渔业研究方向：鱼类生殖发育姓名：仇伟伟指导导师：李名友教授二O一八年四月I上海海洋大学硕士学位论文2018年4月学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本

2、人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名_____________日期:年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文

3、。保密□本学位论文属于，在年解密后适用本版权书。不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日II上海海洋大学硕士学位论文2018年4月上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注中国水产科学研究曾令兵研究员主席院长江水产研究所杜昌升同济大学教授委员孙建和上海交通大学教授委员严亚贤上海交通大学教授委员复旦大学附属眼耳颜标研究员委员鼻喉科医院委员委员季策上海海洋大学博士生秘书水产与生命学院答辩地点答辩日期2018.5.29D101病原库会议室III上海海洋大学硕士学位论文2018年4月青鳉（Oryziaslatipes）性腺miR-202-5

4、p和miR-26a靶基因的验证及表达分析摘要在所有的脊椎动物基因中，MicroRNA(miRNA)占了1%-3%，而miRNA几乎参与了生物体内所有的生理调控过程，miRNA的序列高度保守，表达具有时序性和组织特异性，这些特性表明了其参与生物功能的特异性，调控基因功能的复杂性。早就有研究报道，人类中有约30%的mRNA受到miRNAs的调控，包括疾病的发生、细胞分化与组织发育、细胞凋亡及生殖发育等。而其在性腺发育过程中，miRNA不管是对生殖细胞发育，还是性别分化，性腺成熟都有很重要的调控作用。而miRNA数量众多，miRNA-mRNA之间的结合常常是多对一或者一对多的调控关

5、系，虽然大量的miRNA被发现，但是只有极少数的miRNA被确定其作用，许多其他miRNA的基因作用还未被阐明。因此，发现和确定miRNA的基因并分析靶基因的功能是了解miRNA在不同生理过程中的作用是非常必要的。青鳉是一种小型的，淡水养殖的稻田鱼，是进行发育生物学和细胞生物学等方面研究的良好模式动物，青鳉个体小、鱼卵透明、基因组小且有完整的序列、繁殖快、突变体成百上千，并且其二倍体胚胎干细胞系、单倍体胚胎干细胞系等都已经成功建立，这些资源为研究基因功能进行细胞生物学研究提供了良好的平台。除此以外，青鳉是唯一一个拥有雌性性别决定基因——Foxl3和雄性雄性性别决定基因——Dm

6、y的脊椎动物，在过去的二十年里，很多科研工作者致力于对青鳉的研究，并且获得了良好的基础，发现很多生殖细胞标记基因，像dazl、dnd、piwi和vasa，并且也因此建立了很多相应的转基因品系，Morpholino、Talen以及Cas9等敲除技术均已在青鳉中成功应用，因此，青鳉是一个很适合研究性腺发育和性别分化的模式物种。目前，青鳉中也已经鉴定了一些和性腺发育相关的miRNAs，比如miR-430、miR-202-5p、miR-26a、miR-210等，不过，青鳉中非编码RNA的研究还很欠缺，一方面是青鳉中miRNA的报道并不多，另一方面是因为动物中miRNA-mRNA结合的

7、特性（不完美匹配），使得miRNA的调控具有多样性及联合作用的特点，鉴于miRNA的功能广泛，研究miRNA的调控机制显得尤为重要和迫切。为了弥补这一块的空白，本研究在前期的研究基础之上，有针对性的选择了青鳉中对性IV上海海洋大学硕士学位论文2018年4月腺发育有很重要影响的miRNAs，预测并验证了靶基因，通过对靶基因表达图谱的分析了解了miRNA和靶基因在青鳉性腺发育中的潜在作用。本研究首次通过青鳉鱼体内注射的方法以及双荧光素酶报告系统实验发现了青鳉中miR-202-5p和miR-26a的靶基因——