青鳉性腺发育的组织学观察和dmy、dmrt1基因的表达分析

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1、学校代码：10264研究生学号：M100107295上海海洋大学硕士学位论文青鳉性腺发育的组织学观察和DMY、题目：Dmrt1基因的表达分析ExpressionanalysisofDMYandDmrt1,InvolvedinGonadSexualdiferentiation英文题目：andHistologicalObservationofMedaka,Oryziaslatipes,GonadalSexDevelopment专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：鱼类遗传育种姓名：张静指导教师：陈松林研究员二零一三年四月上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，

2、崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存

3、和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注王清印黄海水产研究所研究员宋林生中国科学院海洋研究所教授李琪中国海洋大学教授温海深中国海洋大学研究员于文功中国海洋大学教授2013年6月黄海水产研究所1号楼3楼会答辩地点答辩日期3日上午议室8：00上海海洋大学硕士学位论文青鳉性腺发育的组织学观察和DMY、Dmrt1基因的表达分析摘要青鳉（Oryziaslatipes）体型小巧，是比较受欢迎的小型宠物鱼。因其繁殖力强且繁殖周期短、产卵量

4、大、透明度高、受精情况易辨别、胚胎发育速度快、对水质敏感等特点，越来越被广泛应用于发育生物学、分子生物学以及毒理学等研究领域，是研究脊椎动物生殖细胞增殖、遗传突变和疾病以及污染物的致毒效应等的良好模式生物。为了更加详细的获得青鳉性别决定和控制的基础资料，本研究从三个方面进行阐述：一是利用特异性引物对青鳉的遗传性别进行鉴定；二是用苏木精-伊红（HE）染液对青鳉不同发育阶段的组织切片进行染色观察，获得青鳉全面的性腺发育资料；三是通过实时荧光定量技术检测DMY和Dmrt1基因在雌雄个体内的表达差异，并结合青鳉不同发育时期的性腺组织切片观察，对它们在性别决定中的功能进行阐述。主要

5、结果如下：1.利用特异性引物鉴定青鳉的遗传性别现在已经有许多关于青鳉遗传性别鉴定方法的报道，但是这些已知的方法需要两对特异性引物，而且，通过此类方法来鉴定青鳉的遗传性别容易出现错误。我们利用Jawahar等设计的这对引物，优化后发现不仅能够鉴出成鱼的遗传性别，对胚胎和幼鱼也同样适用。但我们用这对引物鉴定青鳉的遗传性别，得到异于前人的结果（雄性两条带，一条片段大小为933bp，另一条片段大小为1906bp；雌性仅仅扩增出一条片段大小为1906bp的带），经分析后，我们认为我们的结果更加准确。这对依赖于青鳉遗传性别的生态和生物医学的研究都大有裨益。2.青鳉各个时期性腺组织的发

6、育和分化本文以青鳉孵化后不同时期的生殖腺为材料，经石蜡切片和HE染色后，光学显微镜下观察了青鳉性腺从出现、分化到成熟的发育过程。结果发现：孵化后5-10天的仔鱼腹腔右侧已经可以观察到生殖腺，生殖腺中的生殖细胞体积明显比周围的体细胞大；孵化后10天，青鳉的性腺开始分化，雌、雄性个体的性腺出现结构上的差异，在雌性生殖腺内可以明显观察到生殖包囊结构；随后，在青鳉雌、雄性生殖腺内先后观察到卵子和精子的发生过程；孵化后50天，首次观察到卵巢腔结构和成熟的精子。除此之外，我们还观察到两性特征共存的现象，即，在遗传性别为雄性的生殖腺内，同时观察到卵母细胞和精子结构。这些实验结果将为发育

7、生物学、遗传生物学提供有价值的信息和珍贵的基础资料。3.DMY、Dmrt1基因的表达分析目前，对DMY基因是青鳉雄性性腺发育起始的“开关”基因已经有了较统一I上海海洋大学硕士学位论文的认识；另一个关于青鳉性别控制的“明星”基因是Dmrt1。这两个基因都是青鳉雄性性腺发育的控制因子。但是，目前，我们并不清楚DMY基因是如何控制青鳉雄性睾丸发育和分化的，我们也不清楚Dmrt1基因是如何参与到青鳉雄性性腺发育、分化和成熟的过程中。在本研究中，我们将青鳉性腺发育的组织学观察与DMY、Dmrt1基因的表达分析相结合，检测DMY和Dmrt