弓背青鳉线粒体DNA遗传多样性分析.pdf

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1、广东海洋大学硕士学位论文弓背青鳉线粒体DNA遗传多样性分析摘要弓背青鳉（Oryziascurvinotus）隶属怪頜鳉科（Adrianichthyidae）,青鳉属（Oryzias），是一种广盐性、广温性、产卵量大、世代周期短及易于在实验室饲养的小型鱼类。弓背青鳉（O.curvinotus）是南方沿海分布的土著鱼类，与同属中研究最为清晰的日本青鳉（Oryziaslatipes）亲缘关系密切，且都具有XX-XY性别控制系统，具有极好的理论研究价值。对弓背青鳉（O.curvinotus）生态学调查及其线粒体DNA遗传多样性分析，丰富了其生物学背景研究，为发展弓

2、背青鳉（O.curvinotus）为模式生物的研究提供支撑。具体研究结果主要包括五部分：1.弓背青鳉（O.curvinotus）的生态学调查水的理化指标：盐度范围为0.14-33.57；水温范围为9.58-40.9℃；pH值范围为7.2-9.38；溶解氧的范围为2.11-17.12ppm。弓背青鳉（O.curvinotus）栖息生境特征是：生活在水流平缓并有植物的水域中，一旦食蚊鱼（Gambusiaaffinis）发展成为优势种，弓背青鳉（O.curvinotus）的数量将大大减少。2.盐度对弓背青鳉（O.curvinotus）受精卵孵化的影响粤西高桥地区

3、弓背青鳉（O.curvinotus）的受精卵在淡水到45盐度范围内均可孵化，在25盐度时，受精卵的孵化率最高；在20盐度时，受精卵的孵化周期、培育周期均最长，而低盐度（0-10）和高盐度（40-45）周期相对较短。3.弓背青鳉（O.curvinotus）遗传性别鉴定开发了1对可以快速、准确鉴定弓背青鳉（O.curvinotus）遗传性别的引物，该对引物通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳可以判定检测个体的遗传性别，雄性个体（XY）可以扩增出959bp和656bp2条条带，而雌性个体（XX）只能扩增出1条656bp条带。4.弓背青鳉（O.curvinotus）线粒

4、体基因组全序列测定与系统进化分析测定并注释了弓背青鳉（O.curvinotus）线粒体基因组全序列，结果表明，弓背青鳉（O.curvinotus）线粒体基因组序列全长为16676bp，基因排列和构成与其他硬骨鱼大体一致，包含37个基因和1个控制区。13个蛋白质编码基因，除了COⅠ基因以GTG为起始密码子外，其余编码蛋白基因均以ATG为起始密码子。22个tRNA基因的二级结构均呈典型的三叶草状。基于9种青鳉属（Oryzias）鱼类线粒体基因组全序列构建的进化树表明，弓背青鳉（O.curvinotus）与吕宋青鳉（Oryziasluzonensis）的亲缘关系

5、比较近。5.基于COⅠ基因与D-loop区的南方沿海弓背青鳉（O.curvinotus）遗传多样性I弓背青鳉线粒体DNA遗传多样性分析分析基于mtDNACOⅠ基因分析结果：136条COⅠ基因序列（579bp）中，共发现77个变异位点，碱基转换/颠换比值（TS/TV）为5.42；平均核苷酸差异数、核苷酸多样性、单倍型多样性及单倍型数分别为9.709、0.01677、0.967、52；AMOVA分析揭示遗传差异主要发生在群体间；基于COⅠ基因序列构建的进化树绝大多数个体按照采样点进行聚类。基于mtDNAD-loop分析结果:141条D-loop区序列（507b

6、p）中，共检测到37个变异位点，碱基转换/颠换比值（TS/TV）为2.79；平均核苷酸差异数、核苷酸多样性、单倍型多样性及单倍型数分别为2.923、0.00577、0.911、29；AMOVA分析揭示遗传差异主要发生在群体间；基于D-loop区构建的进化树，多数个体没能按照采样点进行聚类。研究表明，弓背青鳉（O.curvinotus）线粒体COⅠ基因比D-loop区具有更多的信息位点，更适合用于弓背青鳉（O.curvinotus）的遗传多样性研究。根据COⅠ基因和D-loop区序列检测群体遗传多样性的结果，南方沿海弓背青鳉（O.curvinotus）群体的

7、遗传多样性高，群体经历过群体扩张事件，遗传结构分化明显，因此需要划定保护单元。关键词：弓背青鳉；线粒体；遗传多样性II广东海洋大学硕士学位论文GeneticDiversityAnalysisofMitochondrialDNAinOryziascurvinotusAbstractOryziascurvinotusbelongstotheorderofAdrianichthyidae,Oryzias,whichisbroad-salinity,widetemperature,strongtolerancetohypoxia,largeamountofeggs

8、laid,shortgenerationcycles,andeas