p65mir-23a~27a~24调节异常在红系分化障碍中作用的研究

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1、辫j厣交通义訾博士学位论文p65／miR-23a~27a~24调节异常在红系分化障碍中作用的研究指导教师学科专业研究方向申请学位级别学号培养单位答辩日期张永昌傅国辉教授病理学与病理生理学肿瘤发生、早期诊断及靶向治疗医学博士学位0107109040上海交通大学医学院2013年4月19本课题得到国家自然科学基金(编号：N030570697、N030770960、N081171939)和上海市科学技术委员会重大基础研究项目(编号：N01lJCl406700)资助。案j厣交通戈訾DoCToRALDISSERTATIoNRoleof

2、p65／miR-·23a-27a--，24deregulationinerythroiddisorderZhangYong-ChangSupervisorProf．FuGuo-HuiMajorPathology&PathophysiologyFieldofStudyPathogenesis，EarlyDiagnosisandTargetedTherapyofCancerDegreeDoctorofMedicineStudentID0107109040InstituteShanghaiJiaoTongUniversitySc

3、hoolofMedicineDate19April，2013ThisworkwassupportedinpartbytheNationalNaturalScienceFoundationofChina(N030570697，N030770960andN08171939)andKeyBasicResearchProjectoftheScienceandTechnologyCommissionofShanghaiMunicipality(NO1JC1406700)．上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，

4、是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：渺日期：矽J哆年牛月77日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进

5、行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于?不保密酣(请在以上方框内打“√’’)学位论文作⋯：狮耖指剥雠：歹号佃毵日期：尹￡，年’o月，7日日期：∥哆年1D月‘7日上海交通大学博士学位论文中文摘要p65／miR-23a～27a-24调节异常在红系分化障碍中作用的研究摘要MicroRNA(miRNA)在人体发育、肿瘤发生、细胞增殖和凋亡过程中发挥重要作用。MiR．23a-27a-24基因簇(miR-23a-27a-24cluster，miR-cluster

6、)定位于染色体19p13，其编码的pri．miRNA转录本经剪切后形成miR．23a、miR．27a及miR．24三种miRNA。课题组前期研究证实miR-24通过抑制红系特异蛋白一带3蛋白的表达阻碍红白血病细胞系K562分化。本研究在此基础上进一步探讨miR-cluster在红系分化障碍过程中的作用。我们克隆了区间范围为nt．2425～nt．94的一段序列(以pre．miR-24．2第一个碱基为+1)，该序列包含了文献报道的miR-23a-27a-24的启动子核心区域；生物信息学发现转录因子NF．rd3p65(p65)在

7、该序列的nt．243～nt．235区域有作用位点，相关分子实验证明p65直接与该序列结合，上调该序列的荧光素酶报告基因活性，并促进三种miRNA的表达，而三种miRNA可以抑制p65的表达，从而建立p65／miR．23a-27a-24的负反馈调节关系。我们还发现，在定向红细胞分化培养基中培养C57BL／6小鼠骨髓来源细胞(培养第9、10天出现成熟红细胞)3天，p65及磷酸化p65(p—p65)急剧升高，而后快速下降，这一过程与miR．cluster呈现负相关的动态变化，提示了p65／miR．23a-27a-24负反馈调节参

8、与红细胞成熟的过程。培养红白血病细胞系K562于pH7．6或含有促红细胞生成素(Erythropoietin，EPO)的培养基中诱导K562细胞分化，检测分化后p65、p-p65和三种miRNA的表达变化，发现分化后细胞中p65和三种miRNA水平均显著下降，提示K562细胞可能被阻滞在相当于体外培养的