ab血清在终末期红系细胞分化中的作用

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1、AB血清在终末期红系细胞分化中的作用【摘要］目的：探究体外逶导造血干细胞向红系分化过程中AB血潘对终末期红系分化进程的彫响.方法，从肝带血中用免疫磁珠法分葛提取CD34+细胞，体外诱号其向红系分化.根据培养体系中是否添加AB血酒，设直实验组为潘加ABltn渚组，对照组为不添加AB血潘组.通过检测细胞衰面红系分化标志分子穂化血红蛋臼A(jlycophorinA,GPA)>人红细胞阴离子交换蛋白Band3及整合索a4(a4-integrin)的衰达反映终末红系分化逬程，用流式细胞术检测红系细胞终末分化脱核情况.结果，与肘照组相比，实验组GPA阳性细胞百分率较高，Band3表

2、达校高，而a4-integrin«达校低(P<0・05)・实验组细胞脱核百分率明显高于对照组(P<0.05)・结论，在体外红系发育培养体系中，AB血濬对终末期红系分化逬程有一定的促分化、促悦核作用.［关键词］造血干细胞；红系终末分化；AB血渚根据WHO2011年发布的统计数据［1］,全球每年约10.3亿献血志愿者，其屮62%来自占世界总人口75%的发展中国家，这就造成了发展中国家严重的血荒。例如：中国有全球约19%的人口，但是每1000个人屮大约有10个人献血，占全球献血志愿者的0.13%.目前为缓解血液“地域性”“季节性”和“血型性”的短缺现象，并在一定程度上提高输血

3、的安全性，减少血缘感染的可能性，研究者不仅需要从管理层面规范临床用血［2］,也要从技术层面减少输血事故的发生［3］.此外，在献血志愿者Z外，寻找安全、充足、有效的血源也将成为缓解血荒的策略么一。体外诱导造血干细胞向红细胞分化是获得新型血源的可能途径z—。1998年，Malik等［4］成功构建了体外诱导造血干细胞分化为脱核红细胞的模型。2002年，NeildezNguyen等［5］输注体外培养的红系细胞到小鼠体内，发现其可增殖分化为成熟脱核的红细胞，证明体外分化得到的红细胞在临床应用的可行性。目前，国内外很多研究人士致力于摸索廉价、高效、易获得的培养体系，如：Mihara

4、d等⑹发现不需要共培养细胞通过促红细胞素、血管内皮生长因子等的作用可以使造血干细胞体外分化为成熟的红细胞。Fujimi等［7］使用无血清培养基与巨噬细胞共培养来实现体外红系分化。杨超等［8］使用过表达促红细胞生成素的人胎肝基质细胞的培养液提高体外红系分化效率。针对人早期红系分化和终末期红系分化，近年来匕鉴定发现了能区分不同阶段细胞的表面标志物：Li等［9］在早期红系分化屮通过流式细胞术检测CD45,GPA,IL・3R,CD71等表面标志物的表达情况分离爆式红系集落形成单位(burstformingunit-crythoridprecursor,BFU-E)和红系集落形成

5、单位(colonyformingunit-erythrocyte?CFU-E)。Hu等［10］采用流式细胞术检测跨膜蛋白的胞外区，建立人终末红系分化常用的标志分子组合：糖化血红蛋白A(glycophorinA,GPA)、人红细胞阴离子交换蛋白Band3及整合素a4(a4-integrin)«其中GPA和Band3的表达随分化进程不断增加，a4-integrin的表达随分化进程降低。细胞的脱核情况可通过细胞甩片和瑞氏吉姆萨染色观察，也可以借助SYT016等染料对DNA染色［11・12］进而通过流式细胞术检测细胞的脱核率。目前体外诱导造血干细胞分化为红细胞的培养体系还在不停

6、的探索优化中。大部分研究者使用IMDM培养基作为基础培养基，添加一泄量的血清等，再分阶段添加不同的细胞因子，经过不同的培养时间诱导培养某种造血干细胞分化为脱核的红细胞。实验室常用的造血干细胞有：脐带血造血干细胞、外周血造血干细胞、骨髄造血干细胞等。根据共培养细胞的不同，红系分化培养体系可分为四种：与基质细胞共培养［4］、与间充质细胞共培养［11］、与巨噬细胞共培养［7］、无饲养层细胞［6］.根据培养基中添加血清的种类不同或有无，可以把目前报道的培养体系分为3类：胎牛血清类［7・可、人ABlfn.清类［9-10］,无血清类［11］•无血清培养基目前可分为4代［12］:第1

7、代不含血清，但含有大量动物或植物蛋白；第2代完全不用动物来源蛋白；第3代完全没有蛋白或蛋白含量极低；第4代无血清无蛋白。针对红系分化的无血清培养基目前处于第1代的阶段，如StemCell公司出的StemSpanSFEM.AB型血型中有A1B和A2B两种主要亚型，A1B型血清中没有抗体，而A2B型血清中有抗A1抗体。目前使用的AB血清一般都是混合AB血清，来自不同的人，使得AB血清中可能含有A1抗体。在临床造血干细胞移植的案例中，发现供受体ABO血型不合虽不会造成移植后受体ABO血型物质的转变［13］,但是在移植后恢复阶段,ABO血型不合不