mir-918的加工调节机制及其在红系分化中的功能研究

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1、TheProcessingAndregulationMechanismOfMiR一918加1dItsFunctionInE巧ttlroidDi虢rentiationADisseIrtationSubmi仕edtotheG1．aduateSchoolofHenanUniVers时inPartialFulfillmentoftlleI沁quireInentsfortheDegreeofMaSterofMedicineBySupeⅣisor：Pro￡SunGuotaoMay’2014关于学位论文独立完

2、成和内容创新的声明㈣洲Ⅲ删0删㈣㈣㈣洲Y2543204本人向河南大学提出硕士学位中请。本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的，对所研究的课题有新的见解。据我所知，除文中特别加以说明、标注乖致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发袁或撰写过的研究成果，也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作魄凰辜瓣奉穰究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意j．i，．

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9、南大学审核批准躐旗渗譬谚?作为学位论文的诈者，本人完全了解并同意河莳太学有关保留。≤：翻赣i蠢攀翻要求，即透萄大学有权向国家图书馆、科研信息耦构、数据收集机构衣本榱图书馆等攘供学位论文(纸质文本乖电子文本)以供公焱检索、奎阅《本人摭救河南夭学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等昏的扎：可略恭职影印、。缩印、扫描和拷贝等复制手段保存、汇编学位论文(纸质文本乖电子文本)。(涉及保密内容的学位论文在解密后适用本授权书)学位获得者(学位论文作者)釜名：盔垂堡20旭年丁月7日学位论文特教师鍪名：姐：

10、囱涵20胜年r月7日摘要背景：造血过程是人体内各类血细胞的发育、成熟的过程。整个造血分化过程涉及到三个阶段：第一个阶段是造血干细胞(hemopieticstemcells)阶段，这些造血干细胞能通过自我复制(selfrenewal)保持自身数量的稳定，同时又可以分化发育形成各系的定向祖细胞(co姗ittedprogenitors)；第二个阶段是定向祖细胞阶段，这个阶段包括红系祖细胞(CFU—E)、巨核系祖细胞(CFU—MI()、粒一单核系祖细胞(CFU—GM)，和TB淋巴系祖细胞(cFu—TB)

11、；第三个阶段是前体细胞(precursors)及其成熟阶段，这一阶段的细胞进一步分化成熟为具有各类特殊功能的终末血细胞，然后释放进入外周血液。红系分化是体内造血分化过程的重要分支。miRNAs是一类具有18—25个核苷酸、非编码的微小调节性的RNA分子，主要在转录后水平调控基因的表达，参与生命调控的各个方面，并与多种疾病的产生相关。研究发现microRNAs(miRNAs)也参与了红系分化的调控过程。目的：本论文主要研究miR一918的加工调节以及在红系分化中的作用机制。方法：利用实时定量PCR

12、(real—timePcR)筛选了一批与红系分化相关的miRNA，分别针对这些miRNA的primary、precusor、腿ture形式设计引物，用以检测在氯化血红素(hemin)诱导的K562细胞向红系分化过程中的表达变化，收集不同时间点的细胞，确定miR一918在红系分化的表达变化。通过5’一race实验和3‘一race实验获得pri一918的全长转录本，进一步利用RBPDB软件队pr卜918全长进行分析，将候选RNA结合蛋白的si_RNA转染到k562细胞中，hemin诱导向红系分化，利

13、用rea卜timePcR方法检测miR一918primary和mature的表达变化。利用RNA—IP、RNA—EMSA、MS2一船P实验验证QKI与miR一918的结合作用。体外合成miR一918mimic，在细胞系中进行过表达，hemin诱导，用rea卜timePCR方法检测Y—globin的表达变化，用流式分析红系分化的表面标记cD235a／CD71的表达表达。随后在脐带血来源的cD34+干细胞中利用慢病毒进行miR一918的过表达，用流式细胞术检测相应变化。进一步构建可以降低QKI一5表