pd-1对脓毒症小鼠肝脏枯否细胞功能的影响与机制研究

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1、第二军医大学博士学位论文PD．1对脓毒症小鼠肝脏枯否细胞功能的影响与机制研究ContributionofPD--1toLiverKupfferCellDysfunctioninMicewithSepsis研究生：王飞学科与专业：麻醉学研究方向：脓毒症与天然免疫指导老师：邓小明教授培养单位：第二军医大学第一附属医院导师组成员：AlfredAyala教授朱科明教授李金宝副教授二。一三年五月独创性声明本人声明所成交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中

2、不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：土七日期：加，岁年』月爿／日学位论文使用授权书声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入《中国学位论文全文数据库》、《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》等数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描

3、等复制方法和保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：三乇聊签名彩功膨日期：2。，乡年j月J日日期：力多年歹月勿日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4缩略词⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8—1上．—jL4日IJ舌⋯”⋯⋯⋯⋯⋯⋯一”⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯一⋯⋯“⋯⋯⋯·⋯··9第一部分脓毒症小鼠肝脏枯否细胞表面PD．1表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11材料与方法

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯00Oil00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11结讨第二部分PD．1对脓毒症小鼠肝脏枯否细胞功能的影响0001QIIQ⋯．20材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯100lID00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20结讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46第三部分PD一1在脓毒症小鼠肝脏枯否细胞中的信号机制⋯⋯⋯⋯⋯53材料与方法⋯⋯⋯010110⋯⋯000110⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53结讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯···59第四部分PD一1在脓毒症小鼠实体器官中的信号机

5、制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯63材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯63结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OQO00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66讨全文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯75参考文献⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯76综j苤⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯84在读期间发表论文及参加科研工作⋯000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯90致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯93PD-I对脓毒症小鼠肝脏枯否细胞功能的影响及机制研究摘要

6、【研究目的】脓毒症是感染引起的全身炎症反应综合征，死亡率一直居高不下。免疫抑制是脓毒症后期常见的免疫异常状态。巨噬细胞功能障碍是这种免疫抑制的一个重要原因，但是其具体发生机制目前尚不明了。程序性死亡分子1(programmedcelldeathl，PD一1)是近年来发现的共抑制受体，参与外周组织免疫耐受和慢性病毒感染。PD．1基因敲除可以显著提高脓毒症小鼠的生存率，提示PD．1在脓毒症免疫抑制中发挥着重要的作用。本课题拟首先检测PD一1在肝脏枯否细胞的表达，进而应用PD．1基因敲除小鼠，观察PD

7、．1在脓毒症肝脏枯否细胞功能障碍的作用，并初步探索PD．1在枯否细胞发挥作用的分子机制及PD．1参与脓毒症多器官功能障碍的分子机制。【研究方法】1、复制盲肠结扎穿孔(cecalligationandpullc眦，CLP)致脓毒症小鼠模型。将16只野生型C57BL／6小鼠随机分为假手术组(Sham，n=8)和CLP组(CLP,n=8)。术后24h时取肝脏，分离肝脏非实质细胞，应用流式细胞仪检测枯否细胞(F4／80+)表面PD．1的表达水平。2、将10只野生型C57BL／6小鼠及10只PD．1基因敲

8、除小鼠随机分为野生型假手术组(WTSham，n-4)，PD．1基因敲除假手术组(PD．1斗Sham，n_4)，野生型CLP组(WTCLP,n=6)和PD．1基因敲除CLP组(PD—l斗CLP,n=6)。术后24h时，分离肝脏非实质细胞，应用流式细胞仪检测枯否细胞表面MHCH、CD69、CD80和CD86的表达水平。3、将8只野生型C57BL／6小鼠及8只PD．1基因敲除小鼠随机分为野生型假手术组(wTSham，n-4)，PD．1基因敲除假手术组(PD．1士Sham，n-4)，野生型CLP组(WT