细胞珠蛋白检测方法的建立及其在大鼠肝脏纤维化模型中的应用

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文细胞珠蛋白检测方法的建立及其在大鼠肝脏纤维化模型中的应用TheestablishmentofmethodfordetectionofCytoglobinand‘tsapplication‘ratliverfibrosismodeitsOllcatlonmratllVer11Droslsmodell课题来源：自选课题学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院李鹏董文其教授免疫学学术型硕士研究生生物技术学院2013年5月广州＼嘲黜细胞珠蛋白检测方法的建立及其在大鼠肝脏纤维化模型中的应用硕士研究生：李鹏指导老师：

2、董文其教授摘要全世界有超过5％以上的人口患有与肝硬化相关的疾病，在许多国家，肝硬化已经成为一种较普遍的致死病因。肝纤维化是肝硬化的前期病理阶段，是肝脏受到慢性损伤时，细胞外基质(ECM)可逆性沉积的创伤愈合过程。随着对细胞生物学及生物化学的深入的研究，认为肝纤维化的形成是慢性肝损伤过程中多种细胞密切联系，并通过多种细胞因子及细胞外基质蛋白等相互作用、相互影响组成的网络来调控的。肝脏纤维化危害极大，由于肝组织结构的破坏，造成门静脉系统血管阻力增大，形成门静脉高压，导致脾肿大、腹水生成和胃底食管静脉曲张，有上消化道曲张静脉破裂出血的潜在危险。而且由于肝

3、纤维化使正常肝细胞之间的血液微循环通道因纤维组织成分的沉积而造成循环障碍，影响肝细胞的血液供应，使因炎症受损的肝细胞不易修复甚至加重损伤，直至功能正常的肝细胞越来越少，最后导致肝硬化，甚至发展为肝癌。对肝纤维化的治疗主要从几点出发：(1)去除病因治疗。肝损伤严重的部位通常会产生纤维化，而炎症和损伤的严重程度与肝纤维化成正相关，如果早一步去除病因，如病毒、酒精及毒物，这是预防肝硬化最有效的治疗措施。(2)抑制肝星状细胞的激活和增生。(3)增加肝脏细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)的降解。如基质金属蛋白酶及其抑制剂TIMP，或

4、使用尿激酶型纤溶酶原激活剂及其抑制剂。(4)增强肝细胞再生。如肝细胞生长因子(HGF)不仅能刺激肝脏再生，还能阻止肝纤维化的发生并加速其恢复。(5)干细胞治疗。已有研究证实间充摘要质干细胞(MSC)能够通过诱导HSC凋亡起到减轻肝纤维化作用。虽然以上药物在治疗肝硬化过程中有效，但是副作用也大，如肝细胞生长因子有致肿瘤的危险，而尿激酶型纤溶酶原激活剂及其抑制剂可能会引起出血或是血栓形成。现在肝脏纤维化的诊断主要通过三种方法：一是病理活检诊断，这仍然是肝脏纤维化诊断的“金”标准，作为一种创伤性检查，具有明显的局限性，具有一定的风险，患者不易接受，很难保

5、证一次取材能反应肝脏的全貌，有一定的假阴性。二是血清学诊断：主要是肝脏纤维化四项(PCⅢ、LN、HA、CIV)，基质金属蛋白酶(MMP2)及其抑制物(TIMPl)以及细胞因子的检查，但是缺少肝脏特异性。三是影像学诊断：主要利用B超、CT以及MRI进行检查。虽然不能直接诊断肝脏纤维化，但仍有一定的使用价值。还有基于生化指标和超声探测肝脏弹性的Fibrotest和Fibroscan技术，可以无创、快速、定量估计肝脏纤维化程度，但却无法准确区分相邻的纤维化分期，故尚不能完全取代肝活组织病理学检查。因此急需寻找一种全新的方法或指标来诊断肝脏纤维化。目前认为

6、，肝星状细胞(hepaticstellatecell，HSC)在肝纤维化发生发展中起主导作用。在各种致病因素作用下，静止期HSC被激活并增殖、转化为肌成纤维样母细胞，合成和分泌ECM上调，同时合成和释放大量基质金属蛋白酶抑制因子(TIMPs)，使间质胶原酶等蛋白酶活性降低，ECM降解减少，最终导致ECM积聚而发生肝纤维化乃至肝硬化。鉴于HSC在肝纤维化发病机制中的主导作用，大多数抗肝纤维化研究都以HSC为靶标。Kawada等在进行大鼠星状细胞的蛋白质组学研究时，发现了一种新蛋白stellatecellactivation-assosiatedpro

7、tein(S吖巾)。该蛋白在肝星状细胞活化的过程中有明显的上调表达，并且只在肝星状细胞中表达，对其生化特性的研究表明它是一种内源性的过氧化物酶，能够分解过氧化氢和脂质过氧化物，而后两者据报道能激活肝星状细胞，促进肝脏纤维化的形成。通过同源比对，在人的肝脏基因组中又发现了人源肝星状细胞激活相关蛋白(humanStellatecellactivation-associatedproteinhSTAP)，其核苷酸序列与鼠源肝星状细胞激活相关蛋白(ratStellatecellactivation-associatedII硕士学位论文proteinrSTA

8、P)的核苷酸序列有97％的同源性，该基因(GenBankAB057769)位于17号染色体，编码190个氨基酸残基。STA