不同大鼠肝脏模型中分离卵圆细胞的研究

《不同大鼠肝脏模型中分离卵圆细胞的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、浙江大学硕士学位论文不同大鼠肝脏模型中分离卵圆细胞的研究姓名：王宁荐申请学位级别：硕士专业：内科学（内分泌代谢病学）指导教师：陆颖理20070301浙江大学硕士学位论文不同大鼠肝脏模型中分离卵圆细胞的研究浙江大学医学院２００７届硕士研究生内科学（内分泌代谢病学）王宁荐导师陆颖理教授中文摘要背景与目的糖尿病及其并发症给患者本人和家庭带来了极大的病痛和经济负担，也给社会带来巨大的压力。ｌ型糖尿病和后期的２型糖尿病必须补充胰岛素，而外源性胰岛素替代治疗易产生血糖波动，会发生低血糖等严重并发症，依从性的差异也影响其疗效。重建体

2、内胰岛素分泌系统，是理想的根治性方法。成体器官的干细胞可以作为胚胎干细胞的另一选择分化成为胰岛素生成细胞，而且避免了免疫排斥这个难题。肝脏和胰腺从内胚层同一细胞群发育而来，具有相同的祖细胞，因此我们认为肝脏成体干细胞可能在一定条件下转化成胰腺的胰岛素分泌细胞。以下的实验研究是试图寻求合适的模型，以简单的方法得到量和质均相对较好的肝脏卵圆细胞，这是进行肝脏卵圆细胞分化胰岛素分泌细胞等后续研究的基础。材料和方法Ｓｐｒａｇｔｌｅ．Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠分为４组包括空白对照组（ｃｏｎｗ０１）、２－乙酰氨基芴（２．从Ｆ）组、２－ＡＡＷ四氯

3、化碳（ＣＣｌ４）组和２－ＡＡＷ肝切组（２．ＡＡＦ／ＰＨ）．Ｃｏｎｔｒｏｌ组在整个饲养过程中每天灌胃玉米油，剂量４ｍｌ／ｌ（ｇ。２－ＡＡＦ组在整个饲养过程中每天灌胃２０ｍｇ／ｋｇ的２－ＡＡＦ（溶于玉米油中，浓度Ｏ．５％）．２－ＡＡＦ／ＰＨ组先灌胃２０ｍｇ／ｋｇ的２－ＡＡＦ（溶于玉米油中，浓度Ｏ．５％）５天，第６天大鼠在戊巴比妥（０．１ｍＵｌ００９大鼠体重）腹腔注射下进行肝大部切除手术，当天不灌胃１浙江大学硕士学位论文２－ＡＡＦ，术后第ｌ天再开始灌胃２０ｍｇ／ｋｇ的２－ＡＡＦ。２－ＡＡＦ／ＣＣｈ组先灌胃２０ｍｇ／ｋｇ的２－ＡＡＦ（溶于

4、玉米油中，浓度Ｏ．５％）７天，第８天腹腔注射１．９ｍｌ／ｋｇＣｃｌ４（１：１体积溶于玉米油中），术后第ｌ天再开始灌胃２０ｍｇ／ｋｇ的２－ＡＡＦ。时间点从肝大部切除术后和ｃｃｈ腹腔注射后开始算起。糖尿病模型由ＳＤ大鼠腹腔注射含ＳＴＺ６０ｍｇ／ｋｇＯ．ＩＭｐＨ４．５枸橼酸钠液，３天后测血糖高于１６．６７ｍｍｏｌ／Ｌ，表示模型建立成功。肝切和ＣＣｌ４注射后第１３天，大鼠在戊巴比妥钠（Ｏ．１ｍｌ／１００ｍｇ大鼠体重）腹腔注射下全麻，行Ｓｅｇｌｅｎ的二步胶原酶原位灌注消化法，结合密度梯度离心、流式细胞技术结合免疫荧光标记单克隆技术（异硫氰

5、酸荧光素标记的抗大鼠Ｔｈｙｌ．１抗体）分离肝脏卵圆细胞，细胞在含１０％胎牛血清、１０ｒａｇ／ｍ１白血病抑制因子（ＬＩＦ）、１０ｎｇ／ｍｌ巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ｃＳＦ）、１０ｎｇ／ｍｌ干细胞因子（ＳＣＦ）、１０ｎｇ／ｍｌ白介素３（ＩＬ．３）、１０ｎｇ／ｍｌ白介素６（ＩＬ．６）的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基中培养。结果通过流式细胞仪对肝细胞悬液Ｔｈｙｌ。ｌ阳性细胞的分选，结果发现不同的大鼠模型存在不同Ｔｈｙｌ．１（＋）细胞比例。从大到小分别是２・丸ＡＦ（ｏ．５％），２－ＡＡＦ／ＰＨ（Ｏ．３％），２－ＡＡＦ／ＣＣｈ（０．３％）＇ｄｉａｂ

6、ｅｔｉｃｍｏｄｅｌ（Ｏ．１％）和ｃｏｎｔｒｏｌ（Ｏ．Ｏ％）。新鲜分离纯化的细胞呈单个游离状态，培养１２ｈ后开始贴壁，至４８～７２ｈ后大部分细胞贴壁，贴壁细胞呈梭型或多角型，呈现上皮细胞的特点；ｌ周后细胞呈逐渐聚集趋势，３～４周后可见克隆样增殖结构形成，由大小不一、圆形或椭圆形细胞聚集在一起。结论２．儿虾组、２－ＡＡＦ／ＣＣｌ４组和２－ＡＡＦ／ＰＨ是均是较理想的卵圆细胞增殖模型。胶原酶消化法与Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心及流式细胞技术结合免疫荧光标记单克隆技术能有效地分离肝脏卵圆细胞，是分离成体肝脏卵圆细胞有效的方法。胰岛组织损伤可能

7、刺激具有干细胞的组织，使肝脏卵圆细胞等发生增殖。这一发现对将来肝脏卵圆细胞分化为胰岛素分泌细胞的应用有一定的意义。２浙江大学硕士学位论文关键词：ｓＤ大鼠；卵圆细胞；细胞分选；糖尿病３浙江大学硕士学位论文ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＨｅｐａｔｉｃＯｖａｌＣｅｌｌｆｒｏｍＤｉｆｆｅｒｅｎｔＲａｔＭｏｄｅｌｓＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ（ＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙａｎｄＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ）ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＺｈｅｊｉａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣａｎｄｉｄａｔｅｏｆＭａｓｔｅｒＤｅｇｒｅｅＡｄｖｉｓｏｒＮｉｎｇｊｉａｎ

8、ＷａｎｇＹｉｎｇｌｉＬｕＭ．Ｄ．＆Ｐｈ．ＤＡｂｓｔｒａｄＢａｃｋｇｒｏｕｎｄａｎｄＡｉｍＤｉａｂｅｔｅｓｍｅｌｌｉｔｕｓｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎｄｉｓｅａｓｅｓｉｎＣｈｉｎａｗｉｔＩｌａｌｌｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｉｎｃｉｄｅｎ