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1、体外大鼠肝卵圆细胞的长期培养方法尹寿新1，周 震2，马美雪3，杨景波1，羊东晔11中南大学湘雅二医院消化内科，湖南省长沙市 410011；2长沙市第一医院消化内科，湖南省长沙市 410005；3徐州市中心医院消化内科，江苏省徐州市 221009Long-termcultureofhepaticovalcellsinratsinvitroYinShou-xin1,ZhouZhen2,MaMei-xue3,YangJing-bo1,YangDong-ye11DepartmentofGastroenterology&Hepatology,theSe
2、condXiangyaHospitalofCentralSouthUniversity,Changsha410011,HunanProvince,China;2DepartmentofGastroenterology&Hepatology,theFirstChangshaHospital,Changsha410005,HunanProvince,China;3DepartmentofGastroenterology&Hepatology,XuzhouCentralHospital,Xuzhou221009,JiangsuProvince,Ch
3、ina摘要 背景：肝卵圆细胞是目前公认的成体肝干/祖细胞，但其体外长期培养时会不可避免地丢失干细胞的活性。目的：探索大鼠肝卵圆细胞体外长期培养的方法。方法：构建2-乙酰胺基芴/部分肝切除肝再生大鼠模型，通过酶消化和Percoll梯度离心分离纯化大鼠异质卵圆细胞并进行免疫染色鉴定，用含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养基体外长期培养，后撤去表皮生长因子、白血病抑制因子，通过形态学的观察和分子标志物的检测判断其能否保持干/祖细胞活性。结果与结论：采用含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养基体外培养卵圆细胞4个月后，大鼠异质卵圆细胞仍能表达肝细胞标志
4、物ALB、胆管上皮细胞标志物CK-19，经不含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养液继续培养后，卵圆细胞胎肝标志AFP表达量迅速下降。该研究结果表明大鼠肝卵圆细胞在表皮生长因子、白血病抑制因子等培养条件下可长期增殖并保持干细胞活性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程全文链接：窗体顶端关键词：组织构建；组织工程；卵圆细胞；长期培养；表皮生长因子；白血病抑制因子；国locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocu
5、sedontheassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame家自然科学基金； Abstract：BACKGROUND:Hepaticovalcellsarerecognizedasstem/progenitorcellscurrently,however,long-termcultureofhepaticov
6、alcellscaninevitablyresultinthelossofcellactivity.OBJECTIVE:Toexplorealong-termculturemethodofhepaticovalcellsinvitro.METHODS:Partiallyhepatectomizedratmodelwasestablishedbyusing2AAF/PH.Theregeneratedliverwasdigestedbycollagenase,andhepaticovalcellswereisolatedandpurifiedby
7、densitygradientcentrifugationandidentifiedbyimmunocytochemistry.Hepaticovalcellswereculturedinamediumcontainingepidermalgrowthfactorandleukaemiainhibitoryfactor.Thenepidermalgrowthfactorandleukaemiainhibitoryfactorwereremovedafterseveralmonths,anditsabilityofmaintainingstem
8、/progenitorcellactivitieswasdeterminedbasedonmorphologyandmolecularmarkers.RESULTS
