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1、大鼠肝卵圆细胞细胞间黏附分子论文涂玉亮,方驰华,邹玉华【关键词】细胞间黏附分子Expressionandregulationofintercellularadhesionmolecule1inhepaticovalcellsinrats【Abstract】AIM:Toinvestigatetheexpressionofintercellularadhesionmolecule1(ICAM1)inhepaticovalcells(HOCs)andtheregulationofnuclearfactorκB(NFκ
2、B)intheexpressionofICAM1.METHODS:eDAB)for4munocytochemistryedtodetecttheexpressionofICAM1.HOCsiquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)assayountofICAM1mRNAinHOCsculturedmunocytochemistryindicatedthatICAM1expressionotedinTNFαgroup(P0.01)
3、iquantitativeRTPCRassayindicatedthattheexpressionsofICAM1olecule1；hepaticstemcells；NFkappaB【摘要】目的:探讨细胞间黏附分子1(ICAM1)在肝卵圆细胞(HOCs)中的表达,及核因子(NFκB)对其表达的调控作用.方法:0.6g/kg3′甲基4二甲基胺偶氮苯（3′methyldimethylaminoazobenzene,DAB）饲喂1mRNA表达的变化.结果:HOCsICAM1免疫细胞化学检测明显阳性.与对照组比较,体外
4、培养HOCs时TNFα促进HOCs的增殖(P0.01),TGFβ1对HOCs的增殖能力无明显影响；RTPCR半定量分析,与对照组比较，TNFα组ICAM1mRNA相对灰度值增高(P0.01),而TGFβ1组ICAM1mRNA相对灰度值降低(P0.01).结论:在肝损伤组织中HOCs表达ICAM1,TNFα和TGFβ1分别通过对NFκB活性的促进和抑制来调控ICAM1的表达.【关键词】细胞间黏附分子1;肝卵圆细胞；核因子κB0引言近年来,肝卵圆细胞（hepaticstemcells,HOCs）的研究受到重视［1］
5、.在大鼠肝损伤和肝癌模型的肝组织中存在HOCs大量增生［2］,但哪种细胞表达ICAM1还不完全清楚.骨髓造血干细胞（hemopoieticstemcells,HSCs）表面存在一组以ICAM1为主的黏附分子,能介导HSCs与骨髓基质的黏附,从而使HSCs产生一种定向迁移的作用［3］.研究表明,HOCs可以来自于HSCs.既然HOCs可以来自于HSCs,且HSCs表达ICAM1,那么HOCs也应象HSCs一样能表达ICAM1.为此,我们研究HOCs表达ICAM1的证据及其调控.1材料和方法1.1材料1，即用型SA
6、BC试剂盒及DAB显色剂购自武汉博士德生物工程有限公司；引物由上海生工生物工程公司设计合成,βantinsenseprimer5′GCATTGTAACCAACTGGGACG3′,antisenseprimer5′TTGCCGATAGTGATGACCT3′,扩增产物长度为535bp；ICAM1senseprimer,5′CGTGCTGTATGGTCCTCG3′,antisenseprimer5′GGGCTTGTCCCTTGAGTT3′,扩增产物长度422bp；Marker购于上海生工生物工程公司；总RNA提取试剂
7、盒、mRNA逆转录酶、Taq聚合酶购于Promega公司；Ⅳ型胶原酶、TNFα,TGFβ1购于Sigma公司.1.2方法EM基础培养液稀释细胞悬液.高速离心管分装Percoll梯度离心液,细胞液铺于上层,4℃12000g离心30min,吸取700mL/L和500mL/L之间细胞液,DMEM基础培养液稀释,4℃1000g离心30min,弃上清液,用150mL/L胎牛血清稀释细胞密度至1.0×109/L.取4个12孔培养板分别标记为A，B，C，D4组,每组又分为Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ亚组,每亚组4孔,各孔加入上述细胞悬液0.5
8、mL,然后加适量细胞培养基,Ⅰ亚组为空白对照组,Ⅱ亚组和Ⅲ亚组分别加入2.0×105U/L的TNFα和10mg/L的TGFβ1.分别于3.freelLEppendorf管中依次加入上述总RNA1μL,10×逆转录酶缓冲液2μL,AMV逆转录酶2μL,10mmol/L4×dNTPs2μL,RNA酶抑制剂1μL,ICAM1和βactinantisenseprimer等量1μL,然后加入无R
