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1、大鼠肝卵圆细胞细胞间黏附分子涂玉亮,方驰华,邹玉华【关键词】细胞间黏附分子Expressionandregulationofintercellularadhesionmolecule1inhepaticovalcellsinrats 【Abstract】AIM:Toinvestigatetheexpressionofintercellularadhesionmolecule1(ICAM1)inhepaticovalcells(HOCs)andtheregulationofnuclearfactorκB(NFκB)intheexpress
2、ionofICAM1.METHODS:eDAB)for4munocytochemistryedtodetecttheexpressionofICAM1.HOCsiquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)assayountofICAM1mRNAinHOCsculturedmunocytochemistryindicatedthatICAM1expressionotedinTNFαgroup(P0.01)iquantitativeRTPCRassayindic
3、atedthattheexpressionsofICAM1olecule1；hepaticstemcells；NFkappaB 【摘要】目的:探讨细胞间黏附分子1(ICAM1)在肝卵圆细胞(HOCs)中的表达,及核因子(NFκB)对其表达的调控作用.方法:0.6g/kg3＇甲基4二甲基胺偶氮苯（3＇methyldimethylaminoazobenzene,DAB）饲喂1mRNA表达的变化.结果:HOCsICAM1免疫细胞化学检测明显阳性.与对照组比较,体外培养HOCs时TNFα促进HOCs的增殖(P0.01),TGFβ1对HOCs的增
4、殖能力无明显影响；RTPCR半定量分析,与对照组比较，TNFα组ICAM1mRNA相对灰度值增高(P0.01),而TGFβ1组ICAM1mRNA相对灰度值降低(P0.01).结论:在肝损伤组织中HOCs表达ICAM1,TNFα和TGFβ1分别通过对NFκB活性的促进和抑制来调控ICAM1的表达. 【关键词】细胞间黏附分子1;肝卵圆细胞；核因子κB 0引言 近年来,肝卵圆细胞（hepaticstemcells,HOCs）的研究受到重视〔1〕.在大鼠肝损伤和肝癌模型的肝组织中存在HOCs大量增生〔2〕,但哪种细胞表达ICAM1还不完全清
5、楚.骨髓造血干细胞（hemopoieticstemcells,HSCs）表面存在一组以ICAM1为主的黏附分子,能介导HSCs与骨髓基质的黏附,从而使HSCs产生一种定向迁移的作用〔3〕.研究表明,HOCs可以来自于HSCs.既然HOCs可以来自于HSCs,且HSCs表达ICAM1,那么HOCs也应象HSCs一样能表达ICAM1.为此,我们研究HOCs表达ICAM1的证据及其调控. 1材料和方法 1.1材料 1，即用型SABC试剂盒及DAB显色剂购自武汉博士德生物工程有限公司；引物由上海生工生物工程公司设计合成,βantinsens
6、eprimer5＇GCATTGTAACCAACTGGGACG3＇,antisenseprimer5＇TTGCCGATAGTGATGACCT3＇,扩增产物长度为535bp；ICAM1senseprimer,5＇CGTGCTGTATGGTCCTCG3＇,antisenseprimer5＇GGGCTTGTCCCTTGAGTT3＇,扩增产物长度422bp；Marker购于上海生工生物工程公司；总RNA提取试剂盒、mRNA逆转录酶、Taq聚合酶购于Promega公司；Ⅳ型胶原酶、TNFα,TGFβ1购于Sigma公司. 1.2方法 EM基础培养
7、液稀释细胞悬液.高速离心管分装Percoll梯度离心液,细胞液铺于上层,4℃12000g离心30min,吸取700mL/L和500mL/L之间细胞液,DMEM基础培养液稀释,4℃1000g离心30min,弃上清液,用150mL/L胎牛血清稀释细胞密度至1.0×109/L.取4个12孔培养板分别标记为A，B，C，D4组,每组又分为Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ亚组,每亚组4孔,各孔加入上述细胞悬液0.5mL,然后加适量细胞培养基,Ⅰ亚组为空白对照组,Ⅱ亚组和Ⅲ亚组分别加入2.0×105U/L的TNFα和10mg/L的TGFβ1.分别于3，6，9，12d计数A，
8、B，C，D组中各1组的细胞数. 1.2.1ICAM1免疫细胞化学上述细胞液适量滴于防脱片处理的清洁载玻片上,培养8h后细胞黏附贴壁.具体操作按SABC法试剂盒说明进行.光镜下观察结果. 1
