大鼠肝卵圆细胞增殖模型的建立和体外分离的实验研究△-论文.pdf

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1、中国普外基础与临床杂志2013年10月第20卷第10期ChinJBasesClinGeneralSurg，Vo1．20，No．10，Oct．2013论著大鼠肝卵圆细胞增殖模型的建立和体外分离的实验研究△黄钦贤，李海洋，胡毅‘，宋建宁，董标，曹坤【摘要】目的探讨以2．乙酰氨基芴(2一AFF)灌胃与2／3肝切除法联合运用建立大鼠肝卵圆细胞增殖模型的适宜剂量，并探讨肝卵圆细胞的体外分离培养方法。方法将174只Wistar大鼠随机分为4个实验组(各30只)、未处理组(24只)和生理盐水组(30只)。4个实验组大鼠分别给予5、10、15及20mg／(kg·d)2-AAF灌胃(分别对应第1、2、3

2、及4实验组)，于第5天行2／3肝切除，术后继续灌胃至处死大鼠；生理盐水组大鼠以生理盐水灌胃，其余操作同实验组；未处理组大鼠不做任何处理。6组分别于肝切除术后第4、8、12及16天各随机处死6只大鼠。取肝组织行HE染色和免疫组化染色，观察肝卯圆细胞的增殖情况[第4天时同时检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平]；并采用二步胶原酶灌注结合Percoll密度梯度离心法对大鼠肝卵圆细胞进行分离和培养。结果肝切除术后第4天，未处理组、生理盐水组、第1、2、3及4实验组大鼠的存活率分别为100％(24／24)、93％(28／30)、93％(28／30)、90％(27／

3、30)、90％(27／30)及80％(24／30)。肝切除后第4天，与未处理组及生理盐水组比较，第2、3和4实验组大鼠的血清ALT及AST水平均升高(尸<0．05)。HE染色结果显示，第2、3及4实验组大鼠的肝组织均出现不同程度的肝损伤，其中第3和第4实验组均可见明显的肝卵圆细胞增殖反应；免疫组化染色结果显示，第2、3及4实验组卵圆细胞标志6(OV-6)表达阳性细胞数在术后第4、8、及12天，随2-AAF剂量的增加逐渐升高，与2-AAF间呈剂量嫩应关系(P<0．05)。大鼠肝卵圆细胞进行体外分离和培养后，经OV-6免疫组化染色鉴定，有80％的细胞表达呈阳性。结论联合运用15mg／(kg

4、·d)2-AFF灌胃加2／3肝切除，于术后第l2天，有效诱导了肝卵圆细胞的增殖，且造模大鼠的耐受性较好、死亡率低。采用二步胶原酶灌注结合Percoll密度梯度离心法较成功地分离出了大鼠肝卵圆细胞。【关键词】肝卵圆细胞；2一乙酰氨基芴；增殖模型；分离；体外；大鼠【中图分类号】R657．3【文献标志码】AExperimentalStudyonEstablishmentofCellProliferationModelandIsolatedMethod／nVitroofHepaticOvalCellsinAdultRatHUANGQin-xian，LIHai-yang，HUM，SONGJian

5、—ning’，DONGBiao，CAOKun’．*DepartmentofHepatobiliarySurgery，AfiliatedHospitalofGuiyangMedicalUniversity，Guiyang550004，GuizhouProvince，ChinaCorrespondingAuthor：LIHai-yang，E—mail：haiyang_li@sina．com[Abstract]ObjectiveToexploretheproperdosageofestablishmentofstablehepaticovalcells(HOC)prolif-erationm

6、odelbyusing2-acetaminofluorene(2一AAF)combinedwithtwo—thirdpartialhepatectomy(2／3PH)surgery．andtoexploreisolatedandculturedmethodofHOCinvitro．MethodsThe174Wistarratswererandomlydividedinto4experimentalgroups(eachgroupenrolled30rats)，salinegroup=30)，anduntreatedgroup(n=24)．Ratsof4experi—mentalgrou

7、pswereunderwentgavageof5，10，15，and20mg／(kg‘d)2-AAF，correspondingtothegroupsfromNo．1toNo．4group．Ratsofsalinegroupreceivedsalinegavageandratsofuntreatedgroupdidn’treceivedanytreatment．Astandard2／3PHsurgerywasperformedonthe5day