不同急性肝损伤模型大鼠卵圆细胞生物学差异及自噬的变化

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：套V刷币签章．j争研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注等内容外，文中不包括其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进

2、行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：硷i／导师签章：芗严步。沙／弓年≥月澎El日求㈣Y'2337㈣013j中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘⋯⋯一一研究论文不同急性肝损伤模型大鼠卵圆细胞生物学差异及自噬的变化综述肝卵圆细胞生物学特性与肝癌的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一49中文摘要不同急性肝损伤模型大鼠卵圆细胞生物学差异及自噬的变化摘要多种原因均可引起急性肝损伤的发生，急性肝损伤后的高死亡率和预后差一直是医学界的难题。目前如何更好地治疗肝损伤仍是国内外的一个难点。严重的急性肝功能损伤常引起急性肝功能衰竭，致肝功能

3、不可逆转而危及生命。终末期肝病目前最好的治疗方法为原位肝移植，但供体有限及术后免疫排斥反应是两个主要的障碍。卵圆细胞作为肝脏的干细胞，在肝损伤的修复中发挥重要作用。研究发现，卵圆细胞不同时间点其增殖率不同，于此提出卵圆细胞在各时间点增殖动力存在差异，EpCAM和PCNA共表达反应卵圆细胞增殖活性，即各时间点EpCAM和PCNA共表达存在差异。卵圆细胞具有多向分化功能，其可分化为肝细胞、胆管细胞及肝癌细胞，甚至胰岛细胞等，而在对卵圆细胞标记物的研究中发现胆管细胞表达CKl9，肝母细胞表达AFP，可进行卵圆细胞分化方向的判断。判断卵圆细胞的分化研究有助

4、于对肝脏疾病治疗进行评估。近年，自噬与凋亡的研究是热点问题。自噬是一个必不可少的，保守的通过消除蛋白质聚集和破坏细胞器来控制胞浆性质的溶酶体降解过程。自噬与凋亡存在密切关系，两者相互协同而对细胞转归产生影响。而自噬与凋亡的确切关系仍存在争议。卵圆细胞作为肝脏干细胞，参与肝脏的再生性修复及疾病演变，卵圆细胞是否存在自噬现象与其分化与增殖有无关联?本实验建立了不同的急性肝损伤模型，对卵圆细胞在不同情况下增殖及分化有无差异，并对肝损伤修复中自噬及凋亡进行了初步研究。目的：建立不同的肝卵圆细胞增殖模型，观察其增殖、分化的差异及自噬的变化情况。方法：①选择健

5、康SD大鼠随机分为五组，分别为四氯化碳组、D．gal组、假手术组、2-AAF／PH组及空白对照组，建立肝损伤模型。分别于1d、7d、14d、21d处死动物取肝脏组织‘。②采用hematoxylin&eosinstaining(H＆E染色)观察大鼠肝组织病理组织学表现。③免疫荧光技术观察不同时间点卵圆细胞表达，对阳性细胞进行定量技术分析。④免疫荧光双标方法中文摘要观察卵圆细胞增殖动力变化。⑤免疫组织化学方法观察卵圆细胞分化标记物AFP、CK．19、C．kit的表达，并对其进行定量技术分析判断其表达有无差异。⑥电镜下观察卵圆细胞自噬体超微结构。(皇)W

6、estemBlotting技术观察自噬标记蛋白LC3．II蛋白及Beclin．1蛋白表达。⑧原位缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡有无变化。结果：①与空白对照组相比，应用四氯化碳组大鼠肝脏颜色为暗红色，质脆，约14天后渐恢复正常；D—gal组大鼠肝脏水肿明显，色暗红，质脆，约14天后渐恢复正常；假手术组大鼠肝脏与之相比未见明显差异；2-AAF／PH组与之相比，l天肝脏呈淡红色，质脆，约2l天后肝脏大小及颜色恢复正常。②肝脏组织H＆E结果显示，与空白对照组相比，四氯化碳组、D．gal组及2-AAF／PH组可见肝细胞肿胀，排列紊乱，于汇管区周围可见细

7、胞形态小于肝细胞，核质深染，细胞核呈卵圆形的卵圆细胞；四氯化碳组和D．gal组炎症细胞浸润明显比2-AAF／PH组少，卵圆细胞少。③血清肝功能检测显示，大鼠造模完成后第1天肝功能同空白对照组相比，假手术组肝功能变化无明显差异。四氯化碳组、D．gal组及2-AAF／PH组大鼠天门冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase，AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase，铷'一T)及碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)水平明显升高(AST：133．97q-14．35U／Lw8

8、2．47士21．86U／L，P