自噬在不同年龄大鼠终板软骨中的变化.pdf

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1、·3632中华医学杂志2013年12月3日第93卷第45期NatlMedJChina，December3，2013，Vo1．93，No．45．基础研究．自噬在不同年龄大鼠终板软骨中的变化俞云飞徐宏光王弘张巍熊寿良张敏【摘要】目的观察不同月龄sD大鼠终板软骨中自噬的变化及其意义。方法取3、6、12月龄SD大鼠的原代终板软骨细胞，分为自然培养组和雷帕霉素组。茜素红染色观察细胞形态，实时聚合酶链反应和免疫印迹检测软骨标志基因Ⅱ型胶原、SOX一9、蛋白多糖转录因子和基质分解酶相关基因MMP13以及自噬相关基因Beclin．1和LC3基因的表达，单丹

2、磺酰戊二胺(MDC)染色观察细胞的自噬率，四甲基偶氮唑盐(MrITr)法检测细胞存活率。结果茜素红染色显示细胞呈梭形改变，蛋白多糖转录因子、Sox-9和Ⅱ型胶原基因表达呈年龄依赖性降低趋势(P<0．05)，提示随年龄增长，终板软骨细胞出现退变；自噬相关基因Beclin一1和LC3在各组终板软骨细胞中均有表达，且呈年龄依赖性降低趋势[(1．0±0．1)比(0．6±0．1)，(1．0±0．1)比(0．3．4-0，2)；(1．0±0．2)比(0．4±0．1)，(1．0±0．2)比(0．1±0．1)](P<0．05)，自噬发生率也呈现明显降低(P<

3、0．05)。自然培养组中，细胞存活率呈逐渐降低趋势(P<0．05)；与自然培养组相比，雷帕霉素组中各组细胞存活率明显增加(P<0．05)。结论自然增龄大鼠中，终板软骨细胞逐渐出现退变，且存活率降低；上调其自噬水平，可提高细胞存活率，提示呈年龄依赖性降低的自噬活性，可能与椎间盘的自然退变有关。【关键词】椎间盘；软骨细胞；吞噬作用；物理刺激ChangeofautophagyinendplatechondrocytesofratsduringagingprocessYUYun-fei，XUHong-guang，WANG舶，ZHANGWei，XIO

4、NGShou—liang，ZHANGMDepartmentofOrthopedicSurgery，YijishanHospital，WannanMedicalCollege，Wuhu241001，ChinaCorrespondingauthor：XUHong—guang．Email：xuhg@medmaiLCOllkcn【Abstract】ObjectiveToexploretheexpressionandsignificanceofautophagyinendplatecartilageofratsduringagingprocess．M

5、ethodsTheend·platechondrocyteswereisolatedfrom3，6and12一monthSDratsrespectively．Andthenaturalcultureandrapamycingroupswereassigned．Alizarinredstainingwasusedtoobservethemorphologicalchangesofcells．AndRT—PCRwasemployedtodetecttheexpressionsoftypeⅡcollagen，proteoglycan，SOX-9a

6、ndmatrixmetallopr0teinase(MMP-13)．TheexpressionsofBeclin—IandLC3weredetectedbyreversetranscription—polymerasechainreaction(RT—PCR)andWesternblot．Therateofautophagywasobservedbymonodansylcadaverine(MDC)stainingandmethylthiazolyltetrazolium(MTT)forcellsurvivalrate．ResultsAli

7、zarinredstainingshowedthatcellsmightreflecttheprocessofintervertebraldiscdegeneration．Theexpressionsofpolysaccharide，Sox·9，type1Icollagen，Beclin一1andLC3inendplatechondrocytessignificantlydecreasedwithadvancingage(P<0．05)．Theincidenceofautophagysignificantlydecreased(P<0．05

8、)．Thecellviabilityofeachgroupsignificantlydecreased(P<0．05)．Comparedwithcontrolgroup，thec