邻苯二甲酸二丁酯免疫检测方法的建立及在大鼠模型中的应用

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1、万方数据分类号——UDC——密级编号——中研巯火等士学位论文学位申请人姓名：鲎堡申请学位学生类别：全里型蠖±申请学位学科专业：堑堑鲎指导教师姓名：杨旭教授蟛竹博万方数据DOCTORALDISS￡RTATI。N博士学位论文邻苯二甲酸二丁酯免疫检测方法的建立及在大鼠模型中的应用论文作者：指导教师：学科专业：研究方向：曾强杨旭教授动物学动物毒理学华中师范大学生命科学学院2014年10月⑧万方数据博士学位论文DOCTORALDISSERTATIONDissertationEstablishmentofimmunoassays

2、fordibutylphthalatemeasurementandtheapplicationinratmodelByZengQiangSupervisor：Prof．YangXuSpecialty：ZoologyResearchArea：AnimalToxicologySchoolofLifeSciencesCentralChinaNormalUniversityOctober2014万方数据博士学位论文DOCTORALDISSERTAT]ON华中师范大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈

3、交的学位论文，是本人在导师指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律结果Eh本人承担。作者签名：锨学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中师范大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等

4、复制手段保存和汇编本学位论文。体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。同意华中师范大学可以用不同方式在不同媒作者签名：秀嘭敖导师签名：允许北京万方数据电子出版社出版的《中国学位论文全文数据库》将本人论文以电子、网络、镜像及其他数字媒体形式公开出版。作者签名：曾法本人已经认真阅读“CALIS高校学位论文全文数据库发布章程”，同意将本人的学位论文提交“CALIS高校学位论文全文数据库”中全文发布，并可按“章程”中的规定享受相关权益。回重途塞理銮卮澄卮!旦圭生；旦二生；旦三生筮查!作者签名：徽导师签名：彳磊7^刿日期：沙f

5、r年f月y日日期：沙，戽钐月矿日万方数据博士学位论文DOCTORALDISSERIATION邻苯二甲酸二丁酯(Dibutylphthalate,DBP)是酞酸酯类化合物(PhthalateEsters，PAEs)的一种，在现代工业生产和加工中应用面相当的广。其用途主要有增塑剂、胶黏剂、润滑剂等。DBP是通过非共价键的方式与其他化合物进行连接的，稳定性不高，会在加工和使用的过程中，慢慢释放到环境中，对人和环境具有潜在的危害。DBP主要是通过吸入、皮肤接触、食入等多种途径进入人体，有时候医学注射可以成为一种高危险度的暴露

6、方式。摄入的DBP借助摄入与排泄动态平衡的方式在人体内长时间的累积。研究表明，DBP是一种内分泌干扰物，具有生殖毒性、发育毒性以及致癌等危害。现今，针对DBP的检测技术有许多种，但主流的方法还是气相色谱-质谱联用(Gaschromatographycoupledmassspectrometry,GC．MS)和高效液相色谱法(Highperformanceliquidchromatography,HPLC)。但是，这两种方法操作难度大，检测费用高，对设备的要求也高，检测过程耗时，不能实现大量样品的同时检测。因此，建立更

7、好的DBP检测技术，用以了解人体摄入的DBP在机体内的分布和累积情况是人类迫切需要解决的问题。本研究主要分为三个部分。第一部分研究是建立检测DBP的酶联免疫吸附分析技术(Enzyme—linkedimmunosorbentassay,ELISA)。本研究成功制备出能稳定分泌DBP单克隆抗体的杂交瘤细胞，并对其进行克隆化扩大培养，成功筛选出高效价和高亲和力的DBP单抗，建立了问接竞争ELISA的DBP检测技术。此技术操作方便，成本费用较低，同时本研究还对ELISA检测中的几种重要反应条件进行了优化筛选，并在最优条件下建

8、立了间接竞争ELlSA标准曲线：y=15．401Ln(x)．24．13，R2=o．9973。DBP浓度和抑制率之间呈现良好线性关系。第二部分研究是将所开发的DBP单克隆抗体ELISA检测方法用于生物样品的检测。本实验采用口腔灌胃和皮肤涂抹两种染毒方式，对大鼠进行DBP暴露，两种方式的DBP暴露浓度均为200mg／kg／D。连续暴露一周后，在24