溶血磷脂酸在结肠癌细胞中的转移及抗凋亡机制研究

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1、广州医科大学硕士研究生学位论文溶血磷脂酸在结肠癌细胞中的转移及抗凋亡机制研究TheEffectandMechanismofLysophosphatidicAcidOilmetastasisandanti-apoptosisincolorectalcarcinoma专业名称：外科学申请人姓名：高旭灿导师姓名及职称：刘海鹰教授答辩委员会主席：答辩委员会成员：广州医科大学2013年5月目录中文摘要………………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………………3缩略词表

2、及中英文对照………………………………………………………………6前言……………………………………………………………………………………8第一部分LPA与TGFβ1联合促EMT作用1.1引言………………………………………………………………………………131.2材料与方法………………………………………………………………………131.3结果………………………………………………………………………………211.4讨论………………………………………………………………………………22第二部分LPA逆转5-Fu、LOHP的促凋亡作用2.1引言………

3、………………………………………………………………………232.2材料与方法………………………………………………………………………242.3结果………………………………………………………………………………262.4讨论………………………………………………………………………………28结论…………………………………………………………………………………30附图…………………………………………………………………………………31参考文献……………………………………………………………………………37综述……………………………………………………

4、……………………………38参考文献……………………………………………………………………………41致谢…………………………………………………………………………………44学位论文原创性声明………………………………………………………………45i中文摘要溶血磷脂酸在结肠癌细胞中的转移及抗凋亡机制研究专业：外科学硕士研究生：高旭灿导师：刘海鹰教授导师单位：广州医学院附属肿瘤医院摘要目的:1、肿瘤转移侵袭机制存在很多假说，公认的有解剖和机械学说、种子和土壤学说、肿瘤干细胞学说，而目前研究较为热门的为上皮间质转化（Epithelial-to-

5、mesenchymaltransition，EMT）学说。细胞发生EMT后迁移能力增加，有研究表明EMT在肿瘤侵袭及转移中起着关键作用。本研究探讨溶血磷脂酸（LPA）协助转化生长因子1（TGFβ1）的促EMT作用；2、目前大部分化疗药物均为诱导细胞发生凋亡，有研究证明LPA能逆转化疗药物的促凋亡作用，本研究在于探讨LPA能否拮抗5-氟尿嘧啶及奥沙利铂的诱导的结肠癌细胞凋亡及探讨其机制。材料及方法：体外培养人结肠癌细胞SW480、HT-29；运用TGFβ1及LPA诱导SW480细胞，发生形态改变；用Westernblotting蛋

6、白免疫印记技术分析EMT分子标志物E-Cadherin、Vimentin的表达改变；采用MTS比色法检测细胞增殖活性；用流式细胞术（FCM）分析LPA对5-氟尿嘧啶（5-Fu）、奥沙利铂（LOHP）诱导HT-29细胞凋亡及细胞周期的影响；用Westernblotting检测LPA及凋亡诱导剂处理前后细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、CleavedCaspase-3的表达差异。结果：(1)TGFβ1及LPA单独诱导组均能使SW480细胞形态发生EMT改变；联合诱导组细胞EMT改变更为明显。(2)在正常血清对照组、1%FBS空白

7、对照组、LPA组、TGFβ1组、LPA组+TGFβ11广州医科大学硕士学位论文组，细胞内E-Cadherin表达依次下降；Vimentin表达未见明显差异。(3)5-Fu、LOHP均可诱导HT-29细胞发生凋亡及细胞周期G0-G1期阻滞，对其生长抑制作用呈量效和时效关系。LPA能减少5-Fu、LOHP诱导的细胞凋亡，降低S期的比例。(4)Westernblotting检测表明，空白对照组、5-Fu+LPA组、5-Fu组细胞中的Bax及CleavedCaspase-3表达量依次增加；5-Fu+LPA组、5-Fu组、空白对照组细胞中

8、的Bcl-2表达量依次减少；空白对照组、LOHP+LPA组、LOHP组细胞中的Bax及CleavedCaspase-3表达量依次增加；LOHP+LPA组、LOHP组、空白对照组细胞中的Bcl-2表达量依次减少。结论：1、LPA可协助TGF-β1产生EMT作用。提