辛伐他汀对结肠癌细胞ht29的促凋亡作用及可能机制

《辛伐他汀对结肠癌细胞ht29的促凋亡作用及可能机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、东南大学硕士学位论文辛伐他汀对结肠癌细胞HT29的促凋亡作用及可能机制姓名：李宇申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：俞谦2012-05-31中文摘要辛伐他汀对结肠癌细胞HT29的促凋亡作用及可能机制目的：为进一步研究他汀类药物抗肿瘤作用，探讨他汀类药物内在的抗肿瘤机制，本实验通过细胞实验观察辛伐他汀对人结肠癌细胞HT29增殖、凋亡的影响，以及辛伐他汀对凋亡相关Bcl．2、Bax分别在基因水平和蛋白表达水平的调控，阐述辛伐他汀促进人结肠癌细胞HT29凋亡的可能机制，为他汀类药物在结肠癌的预防、治疗方面应用提供理论基础。方法：常规培养人结肠癌HT

2、29细胞，取其对数生长期的细胞进行试验。用不同浓度(终浓度为0、40、60、80、1009mol／L)辛伐他汀分别培养人结肠癌HT29细胞24、48、72h，观察细胞的增殖情况，噻唑蓝比色法(MTT)检测辛伐他汀作用下的细胞吸光度(OD)值，并计算其生长抑制率值；流式细胞仪检测不同浓度辛伐他汀(终浓度为0、40、60、80、1009mol／L)对HT29细胞作用48h后细胞凋亡率；RT-PCR法观察不同浓度辛伐他汀(终浓度为0、40、60、809mol／L)作用48h后HT29细胞凋亡相关基因Bcl．2、BaxmRNA水平；Westernblot

3、ting法观察不同浓度辛伐他汀(终浓度为0、40、60、80pmol／L)作用48h后HT29细胞凋亡相关基冈Bcl．2、Bax蛋白表达情况。本实验以正常培养的HT29细胞(辛伐他汀终浓度为09mol／L)为阴性对照，不同浓度辛伐他汀干预后的HT29细胞为实验组。结果：噻哗蓝比色法(MTT)示辛伐他汀处理后的HT29细胞吸光度(OD)值较对照组降低(P<0．05)，根据OD值汁算所得抑制率随着作『}J浓度的增加、作用时间的延长而增高；流式细胞术榆测发现辛伐他汀埘HT29细胞具有促凋亡作用，随着辛伐他汀药物浓度增大其凋亡率逐渐增高(P

4、RT-PCR试验检测发现辛伐他汀作用HT29细胞后，随着辛伐他汀作用浓度的增高，Bcl．2mRNA条带密度较阴性对照组依次降低、BaxmRNA条带密度较阴性对照组依次增高，各实验组与阴性对照组相比差别具有统计学意义，并呈现}}{浓度依赖性(P

5、胞HT29的增殖，促进结肠癌细胞HT29的凋亡。辛伐他汀干预结肠癌HT29细胞后Bcl．2mRNA和蛋白表达降低；BaxmRNA和蛋白表达增高。在转录及翻泽水平下凋Bcl一2的表达、上调Bax的表达可能是辛伐他汀促进结肠癌HT29细胞凋亡的机制之一。关键词：辛伐他汀；凋亡；人结肠癌细胞；Bcl．2；Bax东南人学伽if：学位论文expressionandupregulatingBaxexpression．Keywords：simvastain；apoptosis；coloncancercells；Bcl一2；Bax东南人学顺Ij学位论文缩略词表B

6、细胞淋巴痛／白血病蛋Bcl．2BcelllymphomaJleukemia2白2BaxBcl一2associatedXproteinBcl．2相关蛋白XCRPC—ReactiveproteinC．反应蛋白DEPCDiethylpyrocarbonate焦碳酸二乙酯DMSODimathylsulfoxideDimathylsulfoxideEBEthidiumbromide溴化乙锭EDTAEthylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸eNOSEndothelialnitricoxidesynthase内皮型一氧化氮合酶FC

7、MFlowcytometry流式细胞仪FPPFamesylpyrophosphate焦磷酸法尼酯HEPESHydroxyethylpiperazineN．2羟乙基哌嗪．N’．2．乙ethanesulfonicacid磺酸Hydroxymethyl—glutarylHMG．CoA羟甲基戊二酰单酰辅酶AcoenzymeAIL．6Interleukin一6自细胞介素63-(4，5一dimethylthiazol一2-y1)一2，5一四唑氮蓝还原法MTTDiphenyltetrrazoliumbromideMAPKMitogen—activatedpro

8、teinkinase丝裂原活化的蛋n激酶MMPsMatrixmetalloproteinases基质会属蛋白质酶MVAmevalonic