ip6对人结肠癌细胞ht29凋亡caspase3基因作用

《ip6对人结肠癌细胞ht29凋亡caspase3基因作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、IP6对人结肠癌细胞HT29凋亡Caspase3基因作用【摘要】　　目的研究肌醇六磷酸（IP6）对人结肠癌细胞HT29的诱导凋亡作用，检测Caspase3基因在IP6处理细胞前后表达的变化，并对IP6诱导人结肠癌细胞HT29的凋亡机制进行初步探讨。方法不同浓度的IP6以不同时间作用于体外培养的HT29细胞，用MTT法检测IP6持续作用对癌细胞增殖的影响；透射电镜观察癌细胞超微结构的变化；用RTPCR方法对IP6作用前后以及作用不同浓度和时间的癌细胞内Caspase3活性进行检测。结果IP

2、6能显著抑制人结肠癌细胞HT29生长，呈剂量与时间依赖性；IP6作用后，HT29细胞出现凋亡的形态学改变；与对照组相比，不同浓度的IP6作用不同时间后，Caspase3mRNA表达均升高（F=8.173～91.755,q=3.960～17.095，P<0.05）,IP6作用6个月组Caspase3mRNA表达升高较其他时间组显著（q=12.858～14.890，P<0.01）。结论IP6具有抑制人结肠癌细胞HT29增殖和诱导凋亡的作用；IP6长期作用诱导细胞凋亡更加显著；Cas

3、pase3基因参与细胞的凋亡调节机制，发挥重要作用。【关键词】植酸HT29细胞细胞凋亡基因Caspase3　　［ABSTRACT］ObjectiveTostudythemechanismsofapoptosisinducedbyInositolHexaphosphate(IP6)inHT29humancoloncarcinomacellline.MethodsHT29cellsculturedinvitroe.TheconstanteffectofIP6onHT29cellsprolife

4、rationorphologicalchangesofHT29cellsicroscope.TheactivityofCaspase3inHT29cellsarkblysuppressedthegroedependentmanner.HT29cellsshoorphologicalchangesofapoptosisafterIP6treatment.paredRNARNAexpressiononthgroupthantherestgroups(q=12.858-14.890,P<

5、0.01).ConclusionIP6cansuppresstheproliferationandinducetheapoptosisofHT29cells.LongerIP6treatmentinducedstrongerapoptosis.Caspase3playsanimportantroleintheregulatorymechanismsofcellsapoptosis.　　［KEYEM/HamF12培养基及胎牛血清均为美国GIBCO公司产品；四甲基偶氮唑盐（MTT），Sigma公司

6、产品；TRIzol试剂，Invitrogen公司产品；反转录试剂盒，Promega公司产品；TaqDNA聚合酶，上海中科开瑞生物芯片科技股份有限公司产品。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养人结肠癌细胞系HT29常规培养于含体积分数0.05胎牛血清、105U/L青霉素和100mg/L链霉素的DMEM/HamF12培养基中。IP6长期作用的HT29细胞培养于含有不同浓度IP6的培养液中（同时含有体积分数0.05胎牛血清，105U/L青霉素和100mg/L链霉素），在37℃，体积分数0.05的C

7、O2培养箱中贴壁生长，定期换液，传代。　　1.2.2MTT法检测IP6对HT29细胞增殖的影响①IP6的作用方式：以不同浓度的IP6（0、1.8、3.3、5.0、8.0、13.0mmol/L）连续作用细胞6d，每2d换液一次；对照组每2d换不含IP6的正常培养液一次。②MTT检测：准确称取50mgMTT粉剂，放入小烧杯中，加50mLPBS（0.01mmol/L，pH7.4）溶液，磁力搅拌器完全溶解后，以装有微孔滤膜（0.22μm）的针式滤器过滤除菌，密封，置4℃冰箱避光保存备用。将指数增殖期细

8、胞加消化液消化制成单细胞悬液，计数,调整细胞密度为2×108/L，取上述细胞悬液接种于96孔板，每孔100mL。于37℃、体积分数0.05的CO2培养箱中培养孵育过夜，使细胞贴壁生长。实验组换含不同浓度IP6(1.8～13.0mmol/L）的培养液，对照组换不含IP6的培养液，37℃、体积分数0.05的CO2培养箱中培养孵育。在设计的时间点（2、4、6d）去掉培养液，加入1.0g/L的MTT50μL，37℃孵育4h。细胞内形成的蓝色结晶溶解于150μLDMSO，酶联免疫检测仪于490nm波长处检