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《脂质体介导的~(99)tc~m标记c-mycmrna反义寡核苷酸的初步研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第14卷第2期同 位 素Vol.14No.22001年5月JournalofIsotopesMay200199m脂质体介导的Tc标记c-mycmRNA反义寡核苷酸的初步研究郑建国,谭天秩,梁正路,李云春,匡安仁,潘卫民(四川大学华西医院核医学科,四川成都 610041)99m99m摘要:在Tc标记DNA的基础上,采用阳离子脂质体对其进行包裹,获得了脂质体介导的Tc2DNA。包裹后的标记物反义寡核苷酸、正义寡核苷酸、无义寡核苷酸的放化纯度分别为(96.5±-13.5)%、(95.3±3.2)%、(94.9±4.5)%;比活度分别为2.0±0.5、1.0±0.2、1.4±0.3GB
2、q·g;99m介导后的寡核苷酸与水、血清孵育后,只有极小量Tc脱落,表明其稳定性较好。99m关键词:脂质体;介导;Tc;c2myc;mRNA;反义寡核苷酸中图分类号:R817192文献标识码:A文章编号:100027512(2001)0220087205放射性核素反义制剂的制备建立在反义技术的基础上,随着反义技术的发展而发展。近10年来,由于载体的使用、反义寡核苷酸稳定性的提高,反义技术的迅速发展,为放射性核素[1]反义制剂的制备提供了理论及实验依据,反义制剂在肿瘤诊断和治疗中的应用倍受关注。放射性核素反义制剂在国内的研究报道较少,在国外起步于90年代中期。1994年Dewan
3、jee[2]111[3]等用In成功地标记了c2myc癌基因的mRNA的反义寡聚核苷酸;1995年Urbain等制[4]111备了erbB2或neu癌基因mRNA的反义探针;1996年Fujibayashi等用In成功标记了c211199m99mmycmRNA反义寡聚核苷酸探针。由于In物理特性不及Tc,随后开始了Tc标记反义[5]99m寡聚核苷酸的研究。Hnatonich等用联肼尼克酰胺衍生物作为螯合剂进行了Tc与反义寡聚核苷酸的偶联,并对标记的单链DNA及其硫代磷酸化衍生物在体外及体内的特性作了比99m较,认为Tc标记的反义寡聚核苷酸体内外稳定,且没有丧失DNA链的活性;1
4、998年张裕民[6]99m等得到英国国家癌症研究基金会的资助,对Tc标记反义寡聚核苷酸探针进行了研究。在99m上述的研究中,虽然已经成功制备了Tc标记的反义寡聚核苷酸,但细胞的摄取有限,还不能用于临床。因而寻求一种有效的载体,增强靶细胞、靶组织的摄取已成为当务之急。脂质体是一类广泛使用的非病毒载体,最简单的一种形式是双层脂质膜环绕一个含水中心,亲水性物质,如药、核酸能与脂质体中的水形成稳定的结合。双层脂质与细胞膜的接触、融合能增强DNA转染的效率。在体外脂质体介导的转染显著优于磷酸钙沉淀和电穿孔,在体内优于质粒DNA转染。脂质体在体内通过生物学降解,来源充足,易于制备、无毒,可
5、通过改变它的大小、收稿日期:2000209218;修回日期:2001202219基金项目:国家自然科学基金资助项目(39870200)作者简介:郑建国(1967～),男(汉族),重庆潼南县人,医学博士,影像学与核医学专业88同 位 素 第14卷 电荷、脂质组成来调节其生物分布和药代动力学,是治疗药物的理想载体。因此本工作拟用脂99m质体包裹Tc标记的c2mycmRNA反义寡核苷酸,并对其性质作初步探索。1 实验材料111 主要试剂Tricine和SnCl2·2H2O:美国Sigma公司产品;EDTA:德国BM公司产品;联肼尼克酰胺衍生物:中国科学
6、院成都分院有机化学所协助合成;玻璃纤维素滤膜:四川大学华西医学中心附属第二医院李林惠赠;鲑精DNA:美国GiBcoBRL公司产品;三氯乙酸:如皋市金陵试剂厂产品;反义寡核苷酸(5′2NH22FACGTTGAGGGGCAT23′)、正义寡核苷酸(5′2NH22FTGC2CCCTCAACGTT23′)、无义寡核苷酸(5′2NH2QTAGGAATGCAGTGG23′):美国GiBcoBRL公司合成(F,Q分别为硫代磷酸化的碱基A,C);C18Sep2Pak反向柱:美国Waters公司产品。112 主要仪器9999mCRC215R放射性同位素定标器:美国Capinted公司产品;Mo2
7、Tc发生器:中国原子能科学研究院产品;FH463A2自动定标器:北京仪器厂产品;FT2603井型闪烁探头:北京核仪器厂产品;CENTRIVAP真空离心干燥器:美国LABCONCO公司产品。2 实验方法99m211Tc-DNA的制备及脂质体包裹99m参考文献[6]的方法用Tc标记DNA,然后按1LgDNA加入25LL脂质体的比例用阳99m离子脂质体对标记产物进行包裹,获得脂质体介导的Tc2DNA。99m212 脂质体介导的Tc-DNA质量鉴定99m99m21211脂质体介导的Tc2DNA放化纯
