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1、第35卷第3期水生生物学报Vol.35,No.32011年5月ACTAHYDROBIOLOGICASINICAMay,2011DOI:10.3724/SP.J.1035.2011.00393PP2A-Aα/β在金鱼及斑马鱼发育中的分化表达模式1*1*1111刘姣付淑君胡雯峰刘方元傅永明唐鸿钊1111,2刘文彬肖亚梅刘筠李万程(1.湖南师范大学生命科学学院,蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室,长沙410081;2.DepartmentsofBiochemistryandMolecularBiology,OphthalmologyandVisualSciences,UniversityofN
2、ebraskaMedicalCenter,Omaha,Nebraska68198,USA)摘要:以金鱼和斑马鱼为研究对象,运用RT-PCR和WesternBlot技术分析蛋白磷酸酶2A(PP2A)结构亚基A(PP2A-Aα/β)在金鱼、斑马鱼成体9种组织和12个发育时期胚胎中mRNA和蛋白水平的表达情况,得到其分化表达模式为:(1)在mRNA水平上,PP2A-Aα/β在金鱼、斑马鱼9种组织中具有较强表达;种属差异性和组织差异性均较大;结构亚基A的两亚型Aα和Aβ的表达存在差异。(2)在蛋白水平上,PP2A-Aα/β在金鱼、斑马鱼9种组织中均有表达;种属差异性不大但出现明显的组织差异性。(3)
3、PP2A-Aα/βmRNA在金鱼和斑马鱼卵裂期到囊胚期胚胎中大量存在,PP2A-AαmRNA在金鱼眼色素期量剧增推测其对金鱼眼色素的形成至关重要。(4)PP2A-Aα/β基因在金鱼、斑马鱼12个发育时期胚胎中均有较高水平的蛋白存在,提示其为维持胚胎的正常发育发挥重要作用。关键词:蛋白磷酸酶2A;PP2A-Aα/β;基因表达;去磷酸化;金鱼;斑马鱼中图分类号:Q344文献标识码:A文章编号:1000-3207(2011)03-0393-07蛋白质的磷酸化与去磷酸化是由蛋白激酶和蛋结构亚基A是催化亚基PP2Ac和调节亚基B结合的白磷酸酶负责的一种细胞内普遍存在的共价修饰的支架,具有15个HEAT
4、motif的重复子串联,催化亚生理调节反应,在细胞生命活动过程中起重要的调基C与HEAT11—15重复序列结合,调节亚基B与控作用。蛋白磷酸酶2A(Proteinphosphatase2A,HEAT1—10重复序列起反应从而与长条形结构亚[6,7]PP2A)是真核生物体内含量最丰富的一类丝氨酸/苏基A相结合。PP2A-A在结构上的特点决定其对氨酸型蛋白磷酸酶,参与细胞代谢、DNA复制、基维持PP2A的功能是必不可少的。结构亚基A有Aα因转录、RNA剪接、蛋白质翻译及翻译后修饰、细和Aβ两种异构体形式,研究发现PP2A-Aα/Aβ基因胞周期、信号转导、细胞分化及凋亡、癌基因转化突变导致PP2A
5、c和B亚基不能与A亚基结合,从而等细胞活动过程,并和神经退行性疾病、肿瘤等多使PP2A的特异活性下降引起癌症发生。人的许多[1—4]种疾病的发生发展有关,已引起人们的普遍关注。初级癌中Aα和Aβ基因发生了突变,15%的初级肺癌PP2A以核心酶和全酶两种形式存在。核心酶由和肠癌是由编码PP2A的Aβ亚基的基因发生突变或[8]65kD的结构亚基A(PP2A-A)与36kD的催化亚基丢失引起。在人黑色素瘤、乳腺癌和肺癌病例中[9]C(PP2Ac)构成,另有分子量为50—130kD不等的调发现PP2A-Aα基因突变。PP2A-A的异常表达能[5]节亚基B与核心酶结合形成三聚体的全酶。PP2A明显下调
6、PP2A活性,43%的脑瘤患者脑组织中收稿日期:2010-04-26;修订日期:2010-11-14基金项目:美国NIHGRANTS1R01EY015765基金和1R01EY018380基金;教育部长江学者及创新团队计划(IRT0445);湖南省芙蓉学者特聘教授基金(24030604);国家自然科学基金面上项目(30971658);教育厅优秀青年项目(08B048)资助作者简介:刘姣(1983—),女,湖南桃江人;博士;研究方向为鱼类发育生物学及细胞凋亡机制的研究。E-mail:liujiao0201@163.com*同等贡献作者通讯作者:李万程,男,湖南衡山人;博士,博士生导师;研究方向为
7、发育生物学和分子细胞生物学。E-mail:dwli1688@hot-mail.com394水生生物学报35卷[10]PP2A活性明显比正常脑组织中低。由此可见,结期、肌肉效应期、心跳期、眼色素期、体色素期、构亚基PP2A-Aα/β的正常表达对PP2A维持正常的出膜期)金鱼和斑马鱼胚胎,用液氮速冻后放生理机能起着重要的调控作用。80℃冰箱用于提RNA和蛋白。鱼类普遍具有繁殖能力强、性成熟早、多次产1.2方法卵
