JNKs在斑马鱼胚胎发育过程中的分化表达及功能研究.pdf

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1、，——————————————————————————————————————————————————一_学校代码!Q5垒2学号200714020062JNKs在斑马鱼胚胎发育过程中的分化表达及功能研究JNKsdifferentiationexpressionandfunction。embr3"developmentfunctioninemDryonictleveloment0I。zebrafish指导教师姓名、职称肖垩植数援湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一一年四月、1l摘要c．Jun氨基末端蛋白激酶(

2、c．JunNH2．terminalproteinkinase，inK)家族是促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)超家族成员之一。小K信号转导通路是MAPK通路的一重要分支，它在细胞增殖、凋亡和细胞应激等多种生理和病理过程中起重要作用。以INK为中心的信号通路可被细胞因子、生长因子、应激等多种因素激活。大量实验证实，卟Ⅸ信号通路在细胞分化、细胞凋亡、应激反应以及多种人类疾病的发生与发展中起着至关重要的作用。为了探讨INK在鱼类个体发育中的生物学作用，本文以斑马鱼为材料，结合RT．PCR和WesternBlot等分子

3、生物学方法，对不同胚胎发育时期斑马鱼胚胎JNKs分化表达进行了系统分析。同时通过JNK特异性抑制剂处理，探讨JNK在斑马鱼胚胎发育中的生物学功能。其结果如下：(1)RT．PCR结果显示jnkl基因在斑马鱼的十二个胚胎发育时期中均检测到RNA水平的表达，从受精卵发育开始到原肠胚时期都逐渐增加，而后降低；在脑泡分化期又出现高表达，然后又逐步下降。蛋白质印迹杂交(WesternBlot)检测结果显示JNKl，JNK2和P．JNK在斑马鱼胚胎发育的过程中也呈现一个波动表达的过程，斑马鱼的十二个胚胎发育时期中均呈现为先

4、增加后减少再增加的趋势。(2)对jnk3基因表达分析表明，在斑马鱼胚胎发育的过程中，jnk3在胚胎发育早期没有表达，神经胚期jnk3开始出现表达，显示jnk3与神经系统的分化发育密切相关。随着胚胎的发育，jnk3表达逐渐升高。在成体组织中，jnk3的表达具有显著的组织特异性，在脑、精巢和心脏中有特异表达。．jnk3基因在组织差异表达，表明它可能参与斑马鱼神经系统、精巢和心脏的发育分化调控。(3)用40nmolJNK特异性抑制剂SP600125对斑马鱼胚胎进行浸泡处理，胚胎发育观察结果表明JNKl抑制对斑马鱼发

5、育有明显的表型影响，SP600125导致斑马鱼胚胎发育迟缓，畸形胚胎显著增加。RT．PCR分析表明SP600125浸泡对胚胎JNKlmRNA表达水平没有明显影响，但蛋白水平的表达则受到了明显的抑制，研究结果表明SP600125对JNK活性的阻断不在mRNA水平，而是在蛋白水平。本文的相关研究结果表明，JNKs的表达与斑马鱼的胚胎发育密切相关。JNK信号通路所导致的下游基因特定表达模式可能是斑马鱼胚胎正常发育的基础。关键词：JNK，斑马鱼，胚胎发育，SP600125，RT．PCR，WesternBlot。ABS

6、TRACTC—JunN—terminalproteinkinase(c-JunNH2一terminalproteinkinase，ⅢK)familyisthemitogen—activatedproteinkinase(MAPK)superfamilymember．AsthecenteroftheJNKsignalingpathwaymaybecytokines，growthfactors，stressandotherfactorsactivation．JNKsignaltransductionpathway

7、isanimportantbranchofMAPKpathway，whichinthecellcycle，production，apoptosisandcellstressandotherphysiologicalandpathologicalprocessesplayanimportantrole．Largenumberofexperimentsconfirmedthat，JNKsignalingpathwayincelldifferentiation，apoptosis，stressresponse，an

8、davarietyofhumandiseasesanddevelopmentplaysavitalrole．InordertoinvestigatethefishintheDevelopmentofJNKbiologicaleffects，thispaperzebrafishasamaterial，combinedwithRT—PCRandWesternBlotmethodssuchasmolecu