eb病毒感染胃上皮ags细胞的比较蛋白质组学研究

《eb病毒感染胃上皮ags细胞的比较蛋白质组学研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中图分类号墅2三：坌UDC610博士学位论文学校代码!Q三三三密级公开EB病毒感染胃上皮AGS细胞的比较蛋白质组学研究ComparativeProteomicAnalysisofEpstein--BarrVirus—．InfectedGastricEpithelialAGSCells作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：]勇临床医学外科学湘雅三医院李小荣教授论文答辩日期坐丝羔：垒答辩委员会主席l垫毖中南大学2013年5月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢

2、的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：I丝日期：尘年』月鱼日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作

3、者签名：二≠驻导师签名蚴期：卫年—￡月生日本课题受-FN基金项目资助湖南省自然科学基金(No．07JJ6051)EB病毒感染胃上皮AGS细胞的比较蛋白质组学研究摘要：EB病毒(Epstein．BarrVirus，EBV)是一种致瘤病毒，己证明多种人类恶性肿瘤如Burkitt’S淋巴瘤、霍奇金病、鼻咽癌和胃癌等与EBV感染相关。EBV感染能导致一系列的细胞效应，尤其是宿主细胞蛋白质合成途径在病毒侵入后出现明显变化。因此，在EBV感染和未感染细胞之间就出现了蛋白表达谱的差异，而这些差异蛋白正是病毒感染细胞、细胞抵御病毒的具体执行者，寻找并鉴定这些蛋白将对认识EBV

4、感染机制提供大量的研究线索。本研究运用比较蛋白组技术对EBV感染胃上皮AGS细胞前后出现的差异表达蛋白进行分析，初步探索病毒一宿主相互作用，对于进一步阐明EBV的感染机制及EBV在胃癌发生发展中可能的作用和机制具有十分重要的意义。本论文由三部分组成：第一章前言概述了EB病毒感染与胃癌的相关性，以及比较蛋白质组学在病毒学的研究现状。本课题将比较蛋白质组学与病毒学相结合，并提出本课题的研究方向。第二章EB病毒感染的胃上皮AGS细胞系的建立，培养及鉴定：采用cell—to—cell感染法建立EB病毒感染的胃上皮AGS细胞系，并通过原位杂交及电子显微镜对EB病毒感染的

5、胃上皮AGS细胞系进行验证性检测。原位杂交和电镜实验结果表明：在EB病毒感染的胃上皮AGS细胞的细胞核内均可检测到EBVEBER一1的表达；在EB病毒感染的胃上皮AGS细胞的胞浆内存在明确的EB病毒颗粒。第三章EB病毒感染AGS的比较蛋白质组学分析为了分析感染病毒后宿主细胞蛋白表达谱的变化，本研究利用蛋白质组学技术对EBV感染和未感染的AGS细胞进行了比较蛋白质组学分析。结果显示，在EBV感染AGS细胞后共有11个蛋白点的表达水平发生了至少2．0倍的上调或下调变化。在这些差异表达蛋白中，我们用质谱(MALDI．TOF和LC．ESI．ITMS)成功鉴定出9种蛋白

6、质，对应于5个上调表达和4个下调表达蛋白质。5个上调表达蛋白质是：热休克同源71kDa蛋白(heatshockcognate71kDaprotein)，细胞质肌动蛋白．1(actincytoplasmic1)，毗多辛．5．磷酸盐氧化酶(pyridoxine．5'-phosphateoxidase)，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶．9(caspase9)，T复合物蛋白1亚单位c【(t—complexprotein1subunitalpha)；4个下调表达蛋白是：锌指蛋白．2(zincfingerprotein2)，细胞周期素依赖性激酶一2(cyclin—dependen

7、tkinase2)，巨噬细胞加帽蛋白(macrophagecappingprotein)，生长分化因子一11(growth／differentiationfactor11)。为了检验蛋白质组研究结果，我们选取细胞周期素依赖性激酶一2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶一9进行了Western—Blot验证。结果显示：细胞周期素依赖性激酶．2在EBV感染的胃上皮AGS细胞组中下调表达；同时，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶一9在EBV感染的胃上皮AGS细胞组中上调表达。这些结果表明两种蛋白的变化趋势与双向凝胶电泳中两种蛋白点变化趋势一致，进一步证明了本研究的蛋白组学结果正确。在我们所

8、发现的差异蛋白中，下调表达的细胞周期素