DDP的比较蛋白质组学研究.pdf

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1、170WWW．tumorsci．org肿瘤2012年3月第32卷第3期TUMORVo1．32，March2012DOI：10．3781／j．issn．1000—7431．2012．03．004Copyright~2012byTUMOR基础研究·BasicResearch人肺腺癌细胞株A549和A549／DDP的比较蛋白质组学研究况鹏，李雪飞，李冰，王永生，李嘉瑜，周彩存同济大学附属上海市肺科医院肿瘤科，上海200433【摘要]目的：比较人肺癌细胞株A549和顺铂(cisplatin，DDP)耐药细胞株A549／DDP中的蛋白表达差异。方法：DDP诱导A549细胞建立DDP耐药细胞株A549

2、／DDP。应用蛋白质组学技术分离鉴定A549和A549／DDP细胞中差异表达的蛋白质，通过real—timePCR、蛋白质印迹法和免疫细胞化学法对部分差异蛋白进行验证；应用生物学信息检索分析差异蛋白的功能。结果：A549和A549／DDP细胞中有8个蛋白质点的表达差异>5倍，分别为POTE、FH(fumaratehydratase)、PDE(ph0sphodiesterase)、AKR1C1(aldo—ketoreductasefamily1，memberC1)、DDH2(dihyrdrodioldehydrogenase2)、S100A10、prefoldinsubunit2和核内转运蛋

3、白，这些蛋白与细胞代谢、凋亡、增殖、解毒和信号转导等有关。Real—timePCR、蛋白质印迹法和免疫细胞化学法验证结果与蛋白质组学研究结果一致。结论：鉴定得到的A549和A549／DDP细胞中的差异蛋白为研究肺癌细胞DDP耐药提供新依据。【关键词】癌，非小细胞肺；蛋白质组学；药物耐受性；顺铂【中图分类号】R734．2【文献标志码]A【文章编号]1000—7431(2012)03—0170—07ComparativeproteomicanalysisofhumanlungadenocarcinomaA549andA549／DDPcellsKUANGPeng，LIXue—fi，LIBing，

4、WANGYong—sheng，LIJia—yu，ZHOUCai—cunDepartmentofOncology，ShanghaiPulmonaryHospital，TongJlUniversity，Shanghai200433，China【ABSTRACT]Objective：TocomparethedifferentiallyexpressedproteinsbetweenA549cellsandDDP(cisplatin)一resistantA549／DDPcells．1ethods：A549cellswereexposedtoDDPfordevelopingtheDDP—resist

5、antA549／DDPcells．Thedi仟erentiallyexpressedproteinsintheA549andA549／DDPceIIswereseparatedandidentifiedbyproteomicsapproach．ApartofthedifferentiallyexpressedproteinswerevaIidatedbyreal—timePCR．Westernblottingandimmunocytochemistry．Thefunctionsoftheseproteinswereanalyzedbybiolnformaticsmethod．Results

6、：Therewere8differentiallYexpressedproteinsincIudingPOTE，FH(fumaratehydratase)，PDE(phosphodiesterase)，AKR1C1(aldo-ketoreductasefamiIy1memberC1)，DDH2(dihydrodioldehydrogenase2)，S1OOA10，Prefoldinsubunit2，andkaryopherinbeta2一RanGPpNHPnucleartransportcomPlexbetweenA549andA549／DDPcells，andthedifferencei

7、nexpressionwasmorethan5一fold．TheseproteinswererelatedwithceIIuIarmetabolism，apoptosis，celIproliferation．detOxificati0nandsignaltransduction。ThevaIidationresultsofreal—timePCR，Westernblottingandimmunocytochemistry