eb病毒感染猪淋巴细胞的研究

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1、课题来源：南方医科大学20If级硕士学位论文EB病毒感染猪淋巴细胞的研究StudyonEBVirusinfectporcinelymphocytes专业名称学位申请人导师指导老师肿瘤学陈胜利姚开泰教授安靓教授答辩委员会主席弛皱盘涩答辩委员会成员型坠面黍．耋堑壅壁弛趱彰益嚷热趱直R驾勉叠耸!蠢叠隧论文评阅人啦纽塾堡彭鱼蠡鱼凄卯f忤6月／o日广州硕士学位论文EB病毒感染猪淋巴细胞的研究硕士研究生：陈胜利导师：姚开泰教授指导教师：安靓教授摘要背景EB病毒(epstein．barrvirus)又称人类疱疹病毒(Humanherpesvirus4(HHV一4))。

2、EB病毒主要感染人类B淋巴细胞和口咽上皮细胞，EB病毒与淋巴瘤、鼻咽癌以及胃癌的发生发展息息相关。鼻咽癌又称广东癌，具有明显的地域性。中国的鼻咽癌患者占世界的80％，而且集中在广东一带，特别是在珠江三角洲、西江流域一带。而欧美国家则较为少见；鼻咽癌可分为高分化型鼻咽癌、低分化型鼻咽癌和未分化型鼻咽癌。其中中国患者以低分化型或未分化型鼻咽癌为主，而欧美国家主要是以高分化型鼻咽癌为主。在绝大多数的低分化型和几乎所有的未分化型的鼻咽癌的活检组织中可发现EB病毒。然而在高分化型的鼻咽癌活检组织中EB病毒却较为少见。EB病毒与淋巴瘤之间的关系研究已经越来越清楚。E

3、B病毒进入B淋巴细胞的途径使通过CR2介导的。CR2分为膜内部分、跨膜部分和膜外部分，其中膜外部分是有15—16个短共有重复序列(SCR卜16)组成。EB病毒与人CR2结合的关键区域是人CR2上的SCR卜2与EB病毒的gp350结合。然而EB病毒与鼻咽癌之间的关系依然存在着许多问题有待解决。目前对于EB病毒到底进入鼻咽上摘要皮细胞的具体途径还不清楚，在细胞水平上研究发现，EB病毒可以通过游离EB病毒形式直接感染鼻咽上皮细胞，也可以是感染EB病毒的淋巴细胞与鼻咽上皮细胞通过细胞与细胞接触形式感染鼻咽上皮细胞，而且这个途径EB病毒感染效率远高于直接感染途径。

4、从第二种EB病毒感染鼻咽上皮细胞的途径，目前提出了一种鼻咽癌发生发展假说：EB病毒首先感染B淋巴细胞，人的鼻咽部组织中有丰富的淋巴组织，这样使得感染EB病毒的淋巴细胞与鼻咽上皮细胞接触，从而使鼻咽上皮细胞感染EB病毒。再经过多次的基因突变，最终发展为鼻咽癌细胞。EB病毒对鼻咽癌发生发展起到重要作用，但仍然有许多问题有待解决，目前认为EB病毒的LMPl、LMP2A等基因对鼻咽癌发生发展起到重要作用，其中LMPl已被确认为是一种癌基因。由于鼻咽癌发生的解剖部位隐匿，且鼻咽癌具有明显的区域性，在国际上研究相对较少，这造成目前鼻咽癌的发生发展有许多问题有待解决。

5、这样，构建EB病毒相关的鼻咽癌动物模型对于研究EB病毒与鼻咽癌之间的关系，以及EB病毒在鼻咽癌的发生发展所起到的作用具有重要的意义。目前的鼻咽癌动物模型主要是以小鼠的鼻咽癌模型为主，然而鼻咽癌的猪动物模型还未曾有相关的报道。而且猪的鼻咽癌动物模型相对小鼠鼻咽癌动物模型有几大优势：1、有文献报道猪能够得白发性鼻咽癌。然而，未见小鼠自发性鼻咽癌的报道。2、猪与人之间在遗传水平上的同源性相对比小鼠的同源性更高。3、猪在解剖、组织、生理和营养代谢等方面与人类相近。4、由于解剖结构的原因(小鼠鼻咽部较较为狭窄，成瘤之后容易引起窒息而死)猪的鼻咽癌模型比小鼠鼻咽癌模

6、型在成瘤后生存时间更长。在构建猪鼻咽癌模型前需要先了解EB病毒与猪的亲和性。首先我们知道人淋巴细胞对EB病毒的亲和力比人鼻咽上皮细胞对EB病毒的亲和力更高，并且可以在体外用踮病毒诱导人外周血B淋巴细胞转化为永生化的B淋巴母细胞，而且目前认为EB病毒感染鼻咽上皮细胞是通过感染EB病毒的淋巴细胞通过与鼻咽上皮细胞间接触而感染；其次是猪外周血淋巴细胞相对鼻咽上皮组织取材硕士学位论文更加容易。所以本文通过用EB病毒在体外感染猪外周血淋巴细胞，观察是否使猪淋巴细胞感染EB病毒，是否可以使猪淋巴细胞转化为永生化淋巴母细胞。来研究EB病毒对猪的亲和性。从而对构建EB病

7、毒相关的猪鼻咽癌动物模型起到一定的指导意义。研究方法第一部分：EB病毒感染猪淋巴细胞l、从B95—8细胞株(EB病毒转化的绒猴淋巴细胞)中提取EB病毒。2、所提取的EB病毒分别感染猪、人外周血淋巴细胞以及小鼠脾脏淋巴细胞(研究表明EB病毒能够再体外转化人淋巴细胞，设为阳性对照；EB病毒不能在体外转化小鼠淋巴细胞，设为阴性对照)：首先用人淋巴细胞分离液分别从猪、人外周血淋巴细胞中分离出猪淋巴细胞和人淋巴细胞，以及用小鼠淋巴细胞分离液从小鼠脾脏研磨液中分离出小鼠淋巴细胞；然后再用EB病毒分别感染猪、人、小鼠淋巴细胞，此为实验组。未用EB病毒感染的猪、人、小鼠

8、淋巴细胞为对照组；将实验组和对照组在同等条件下培养30天，在第1、4、7、10、