京尼平苷对兔膝骨关节炎滑膜细胞影响的实验研究

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1、分类号R684密级公开UDC610硕士学位论文京尼平苷对兔膝骨关节炎滑膜细胞影响的实验研究学位申请人：李传郡学科专业：外科学指导教师：鲍同柱主任医师二○一三年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineGeniposidicExperimentalStudyoftheRabbitKneeJointSynovialCellsGraduateStudent:LiChuanjunMajor:

2、surgerySupervisor:Prof.BaoTongzhuTheFirstCollegeofClinicalMedicalScience,ChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2013三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明

3、确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果

4、。学位论文作者签名：日期：I三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：本实验通过研究京尼平苷对体外培养兔膝骨关节炎滑膜细胞增殖、凋亡、TNF-a表达和培养细胞上清液中IL-1、TNF-α的含量的影响，探讨京尼平苷对OA滑膜细胞的作用及机制，为临床应用中药栀子治疗OA提供理论指导。方法：采用改良Hulth法制备兔膝OA模型15只(前交叉韧带、内侧副韧带切断+内侧半月板切除)，根据形态学、影像学、生化指标进行模型鉴定。提取模型组滑膜细胞，原代培养、传代，取对数生长期细胞进行实验。A组：不含京尼平苷（GeniposideGen）；B组

5、：20ug/mlGen；C组：40ug/mlGen；D组：60ug/mlGen；E组：80ug/mlGen。MTT比色法检测京尼平苷对滑膜细胞增殖的影响；Western-blot检测BCL-2及TNF-α蛋白的表达；ELISA法检测滑膜细胞上清液、血清IL-1和TNF-α含量。结果：从形态学、影像学、生化指标表明改良Hulth法成功构建兔膝OA模型。关节液中IL-1含量：正常组77.64±9.37pg/ml；造模4W175.52±18.7pg/ml,与对照组相比*P<0.05；造模8W363.42±54.11pg/ml，

6、与对照组相比*P<0.05。关节液中TNF-α含量:正常组49.99±5.28pg/ml；造模4W143.38±48.34pg/ml,与对照组相比*P<0.05。造模8W280.72±42.24pg/ml，与对照组相比*P<0.05。血清中IL-1含量:正常组10.66±1.04pg/ml；造模4W51.19±4.66pg/ml,P；造模8W96.83±9.48pg/ml,P，血清中TNF-α含量:正常组：15.74±1.05pg/ml；造模4W：25.22±2.43pg/ml；造模8W：46.15±7.04pg/ml。

7、Gen四个浓度（B、C、D、E）对滑膜细胞的抑制率分别为，各组24小时抑制率分别为：（5.65±3.5）%，（7.03±1.6）%，（6.03±1.5）%，（2.89±3.0）%；48小时抑制率分别为：（8.01±3.8）%，（8.32±2.3）%，（6.67±2.6）%，（3.47±3.7）%；72小时抑制率分别为：（3.29±2.3）%，（3.17±1.3）%，（2.27±2.3）%，（1.70±4.3）%。随着Gen浓度的不断增加，细胞抑制率增加，呈现明显的浓度依赖关系，滑膜的抑制率高于对照组（P＜0.05)。Ge

8、n四个浓度（B、C、D、E）对滑膜细胞中BCL-2、TNF-α蛋白的表达分别为，各组BCL-2蛋白表达分别为：（0.873±0.0084），（1.013±0.0017），（1.156±0.019），（1.311±0.021），（1.672±0.017）。与对照组相比随着给药浓度的增加Bcl-2蛋白的表达也在逐渐降低。