京尼平苷对兔膝骨关节炎软骨细胞影响的实验研究

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1、分类号R6密级公开UDC610硕士学位论文京尼平苷对兔膝骨关节炎软骨细胞影响的实验研究学位申请人：赵振国学科专业：外科学指导教师：鲍同柱主任医师二○一三年五月ADissertationSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineTheExperimentalStudiesofGeniposideonRabbits′KneeOsteoarthritisGraduateStudent:ZhaoZhenguoMajor:SurgerySupervisor:Ba

2、oTongzhuchiefphysicianChinaThreeGorgesUniversityYichang,443002,P.R.ChinaMay,2013三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：2013年5月三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大

3、学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：日期：2013年5月II三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：本实验通过研究京尼平苷对体外培养兔膝骨关节炎软骨细胞的增殖、Ⅱ型胶原、周期蛋白2（CDC2

4、）表达和软骨细胞培养上清液中IL-1、TNF-α含量的影响，探讨京尼平苷对OA软骨退变的保护作用及可能的机制，为临床应用中药栀子治疗OA提供理论指导。方法：采用改良Hulth法制备兔膝OA模型(前交叉韧带+内侧副韧带切断、内侧半月板切除)，15只日本大耳白兔随机分为：A模型组12只；B正常组3只，通过形态学、影像学、生化指标鉴定模型，提取正常组、模型组软骨细胞，原代培养、传代。光镜观察原代、二代、四代细胞形态，免疫荧光和ELISA检测模型组软骨细胞Ⅱ型胶原表达以及细胞培养上清液中IL-1、TNF-α含量鉴定兔膝OA软骨细胞。培养兔膝OA软骨细胞应用不同浓度京尼

5、平苷（20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml）干预：噻唑蓝染色（MTT）法检测软骨细胞增殖，Western-blot检测Ⅱ型胶原及细胞分裂周期分裂基因2（CDC2）蛋白的表达，PCR检测Ⅱ型胶原mRNA的表达；ELISA检查培养兔膝OA软骨细胞上清液中IL-1、TNF-α含量影响。结果：从形态学、影像学、生化指标表明改良Hulth法成功构建兔膝OA模型，关节液中IL-1含量为正常组77.64±9.37pg/ml；造模4W175.52±18.7pg/ml；造模8W363.42±54.11pg/ml，关节液中TNF-α含量为正常组：49.9

6、9±5.28pg/ml；造模4W143.38±48.34pg/ml；造模8W280.72±42.24pg/ml，血清中IL-1含量为正常组10.66±1.04pg/ml；造模4W51.19±4.66pg/ml；造模8W96.83±9.48pg/ml，血清中TNF-α含量为正常组15.74±1.05pg/ml；造模4W25.22±2.43pg/ml；造模8W46.15±7.04pg/ml（P<0.05）。原代兔膝OA软骨细胞呈多角形，培养72h后基本贴壁，传代后细胞生长加快，随着传代次数的增加细胞逐渐出现去分化现象，呈圆形，多短触角；免疫荧光检测模型组软骨细胞中

7、有Ⅱ型胶原表达。ELISA检测模型组软骨细胞培养上清液中IL-1、TNF-α含量增高，IL-1含量为正常组6.948±0.48pg/ml；VS造模组65.47±5.52pg/ml，TNF-α含量为正常组5.13±0.74pg/ml；VS模型组45.49±3.99pg/ml（P<0.05）。鉴定兔膝OA软骨细胞。随着给药浓度的不同（20ug/ml、40ug/ml、60ug/ml、80ug/ml）对兔膝OA软骨细胞增殖有明显的促进作用，各组24小时增殖率分别为（3.87±5.61）%、（23.48±3.50）%、（11.16±7.048）%、（9.29±3.43）

8、%；48小时增殖率分别为（30.01±