京尼平苷对巨噬细胞上清液刺激rsc-364细胞的影响及作用机制的研究

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2、写的研究成果，指导教师对此进行了审定·本论文由本人独立撰写，文责自负·研究生签名：捌导师签章：寒；亿≯l芍年6J)p日万方数据目录中文摘要1英文摘要6英文缩写”11研究论文京尼平苷对巨噬细胞上清液刺激RSC一364细胞的影响及作用‘机制的研究前言刚吾1212材料与方法··13结果”23附图27附表37讨论40结论44参考文献44综述滑膜细胞及相关细胞因子对类风湿关节炎的影响”47致谢．．58个人简历59万方数据中文摘要京尼平苷对巨噬细胞上清液刺激RSC-364细胞的影响及作用机制的研究摘要目的：类风湿关节炎(rheu

3、matoidarthritis，RA)是一种广泛分布于全身的，以手、腕部小关节多发的自身免疫性疾病，其错综复杂的病因和发病机理迄今为止仍未完全探明。该病遍布世界各地，各个种族均有发病，世界平均患病率为1～1．5％，我国患病率为0．34％'-'0．36％，以女性多发，男女比例1：3，本病在任何年龄段均可出现，以30至50岁发病最为常见。随着病程的发展，致残率不断增加，已成为导致我国青壮年劳动力丧失的主要疾病之一。RA的传统治疗药物主要包括非甾体类抗炎药、糖皮质激素类药物和改善病情的抗风湿药三大类，这些药物主要用于控制和

4、缓解疾病症状，长期用药会产生严重的不良反应。本实验室研究报道，栀子及其单体京尼平苷(geniposide，Ge)能够显著抑带IJCIA大鼠血清中的致炎细胞因子IL．1p和TNF．a水平，Ge可以通过诱导细胞凋亡从而抑制C认大鼠滑膜细胞增殖。巨噬细胞可通过分泌多种炎症介质、基质金属蛋白酶、细胞因子和生长因子等在RA关节破坏中发挥着重要的作用。京尼平苷属于环烯醚萜苷类化合物，又名栀子苷，主要存在于栀子、杜仲等中药植物中，其主要作用为抗炎、抗肿瘤、抗血栓、保护神经元，此外对于骨质疏松的治疗也有一定的疗效。本实验采用佛波酯(

5、phorbolmyristateacetate，PMA)诱导单核THP．1细胞分化为巨噬细胞，在脂多糖(1ipopo!ysaccharide，LPS)的刺激下，巨噬细胞培养上清液造成滑膜细胞RSC．364炎症模型后，加入不同浓度的京尼平苷，研究京尼平苷对巨噬细胞上清液刺激后RSC．364细胞及其信号转导通路的影响，以便进一步对该药物的特性和机理进行探讨和说明。方法：1佛波酯(phorbolmynstateacetate，PMA)诱导单核细胞THP．1分化为巨噬细胞后，加入脂多糖(1ipopolysaccharide，

6、LPS)刺激获取培养上清液。2将大鼠滑膜细胞RSC．364分为对照(培养基)组，模型(上清液)万方数据中文摘要组，甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)组(1xlO乇moFL)，京尼平苷高(1xlO‘5mol／L)、中(1x10咱mol／L)和低(1×100mol／L)三种剂量组，共六组。采用MTT法检测滑膜细胞增殖，分别观察滑膜细胞在24h、48h和72h后的细胞增殖率。3将分别给药后的RSC．364滑膜细胞继续培养72h，用Hoechst33342和AO．PI双染分别进行细胞染色。在荧光显微镜下观察给予三种

7、不同浓度京尼平苷药物后凋亡和坏死的RSC．364滑膜细胞的形态学改变。4用流式细胞仪测定对照组，模型组，MTX阳性药物组(1xlO击moFL)，Ge高(1×10’5mol／L)、中(1X10‘6mol／L)、低(1xlO‘7mol／L)各组中的RSC．364细胞中的总DNA含量并计算细胞凋亡率。5用ELISA法分别测定对照组，模型组，MTX阳性药物组(1×10‘6mol／L)，Ge高(1xlO’5mol／L)、中(1×10一mol／L)、低(1xlO’7moFL)各组中RSC．364滑膜细胞上清液中的TNF一仅、IL

8、．1p、IL．6、IL-10、MMP．3和MMP．9浓度表达水平。6放射免疫法分别测定对照组，模型组，MTX阳性药物组(1x10击mol／L)，Ge高(1x10‘5mol／L)、中(1x10～mol／L)、低(1xlO。mol／L)各组中RSC．364滑膜细胞内环磷酸腺苷(cyclicadenosinemonophosphate，cAMP)蛋白