ghrelin通过mapk-erk信号通路抑制血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化的作用机制研究

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1、中图分类号拯竖星苎UDC臣坦博士学位论文学校代码密级．{口妈3Ghrelin通过MAPK-ERK信号通路抑制血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化的作用机制研究Ghrelinattenuatesthedifferentiationofvascularsmoothmusclecellsintoosteoblast·-likecellsthroughtheMAPK-·ERKpathway作者姓名：蒋谊学科专业：I临床医学研究方向：内科学(代谢性骨病学)学院(系、所)：湘雅二医院指导老师：廖二元教授论文答辩日期巡：!堡答辩委员会主

2、越中南大学二。一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：二垂之日期：丝年二朗坦日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅

3、；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。：庭丛年上月也日博士学位论文中文摘要摘要第一部分Ghrelin抑制血管平滑肌细胞向成骨样细胞的分化目的：确定Ghrelin对血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化的影响方法：分离、培养和鉴定小鼠血管平滑肌细胞，用10。6m01／LGhrelin干预，0、24、48、72小时后，收集细胞及培养上清。以ALP检测试剂盒检测不同时间点细胞AL

4、P的表达差异；观察矿化结节形成，并测定矿化结节的钙含量；以蛋白免疫印迹检测Runx2蛋白表达的差异。结果：Ghrelin干预血管平滑肌细胞后，与对照组相比，Ghrelin干预组中ALP的活性明显受到抑制，而且为时间依赖性，具体表现为24小时出现受抑制，48小时达到高峰。培养12天以后，Ghrelin抑制血管平滑肌细胞矿化结节的形成，对照组的钙含量显著高于Ghrelin干预组。两组的Runx2表达与ALP活性变化相似，在与Ghrelin共同培养的血管平滑肌细胞中，Runx2的表达显著低于对照组。结论：Ghrelin呈时

5、间依赖性抑$1]ALP活性和Runx2表达，减少矿化结节的形成，提示Ghrelin抑制血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化。关键词：血管平滑肌细胞，Ghrelin，骨碱性磷酸酶，核心结合因子c【1II博士学位论文中文摘要第二部分Ghrelin调控血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化过程中的MAPK信号分子变化目的：探讨Ghrelin是否影响血管平滑肌细胞中的MAPK信号通路活性。方法：Ghrelin干预小鼠血管平滑肌细胞0、5、10、15、30和60分钟。分别提取细胞总蛋白，蛋白免疫印迹检测p-ERK、总ERK、p-p38、总p

6、38、p-JNK和总JNK的表达量。结果：Ghrelin干预5分钟时，可检测出微弱磷酸化ERK信号，随干预时间延长至10分钟、15分钟和30分钟，磷酸化ERK蛋白表达渐次增强，30分钟达到表达高峰，但一直无法检测到JNK和p38磷酸化信号。结论：Ghrelin激活血管平滑肌细胞MAPK．ERK信号通路活性。关键词：血管平滑肌细胞，Ghrelin，ERK，JNK，p38III博士学位论文中文摘要第三部分Ghrelin调控血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化的细胞信号机制研究目的：探讨Ghrelin调控血管平滑肌细胞向成骨样细

7、胞分化的信号传导途径与作用模式。方法：用RNA干扰(siRNA)技术阻断血管平滑肌细胞表达生长激素促分泌素受体(growthhormonesecretagoguereceptor，GHSR)，用ERK信号通路阻断剂PD98059阻断ERK磷酸化，然后以lO。6MGhrelin干预GHSR-siRNA组、阴性对照组、空白对照组及PD98059组的血管平滑肌细胞，同时以未用Ghrelin干预的阴性对照组、PD98059组、空白组做为对照，培养72小时后，应用蛋白免疫印迹检测p-ERK、ERK蛋白的表达以及测定各组ALP活

8、性。结果：RNA干扰(siRNA)z日‘匕l-,成功沉默GHSR，在Ghrelin干预情况下，GHSR-siRNA组血管平滑肌细胞ERK磷酸化被显著抑制，而阴性对照组和空白对照组的血管平滑肌细胞ERK信号途径依然被激活。ERK信号通路阻断剂PD98059可以有效阻断Ghrelin干预后的ERK磷酸化。在Ghrelin干预情况下，阴性对照组和GH