1.rankl介导ghrelin抑制血管平滑肌细胞成骨样分化的机制研究2、ghrelin抑制成骨细胞mc3t3-e1凋亡的作用机制研究

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1、中图分类号星望2：羔UDC厶f旦博士学位论文学校代码!Q§兰三密级公珏1、RANKI，介导Q鹏lin抑制血管平滑肌细胞成骨样分化的机制研究2、melin抑制成骨细胞MC3T3．E1凋亡的作用机制研究1．TheR．oleofRANKIJinMechanismof(melinInhibitingOsteoblasticDi虢rentiationofVascularSmoothMuscleCells2．MechanismofII蚰bito巧E虢ctsofG1ⅡelinonApopt9sisofOsteoblasticMC3T3一ElCells作者姓学科专研究方学院(系、指导教论文答辩

2、日期名：梁秋华业：l临床医学向：内科学所)：湘雅二医院师：廖二元教授答辩委员会主蕴遗中南大学二O一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：—錾纽车日期：卫年』月卫日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允

3、许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。：型年』月丛日博士学位论文中文摘要摘要第一部分RANKL介导G11relin抑制血管平滑肌细胞成骨样分化的机制研究第一章Ghrelin下调RANKL在小鼠血管平滑肌细胞的表达目的：观察核因子．KB受体活化因子配体(receptoractivatorfornuclearfactor-KBligand，RANKI，)在小鼠血管平滑肌细胞(vascularsmoothmus

4、clecells，VSMCs)成骨样分化过程中的表达，以及Ghrelin对RANKI，表达的影响。方法：分离小鼠的原代VSMCs，细胞免疫化学法及W-estemblot法检测平滑肌肌动蛋白0【(smoothmuscle0【一actin，SMcc—actin)，鉴定其细．胞表型；使用10mMp一甘油磷酸钠(p·glycerophosphate，p—GP)诱导小鼠原代VSMCs向成骨样细胞分化，以lO～～10培M的Ghrelin干预p—GP诱导的小鼠VSMCs，W．estemblot分析法检测Rum相关转录因子2(Runt．relatedtranscriptionfactor2，R

5、-unx2)蛋白的表达；荧光定量PCR(p01ymerasechainreaction)检测RANKI，、RunX2、骨形成蛋白一2(bonemo印hogeneticprotein一2，BMP一2)mRNA的表达；酶联免疫吸附法(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)检测RANKI，蛋白的分泌量；碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)试剂盒检测ALP活性；茜素红染色观察矿化结节的形成情况。结果：(1)成功分离了小鼠原代VSMCs，细胞免疫化学法及Wrestemblot结果显示SMu—actin表达阳性；(2)p—GP可显

6、著增加I№x2和BⅧ．2的表达，增强ALP活性，TT博士学位论文促进矿化结节形成；在p—GP诱导的小鼠VSMCs向成骨样细胞分化的过程中RANKI，mRNA和蛋白的表达量均显著增加；(3)10。6～10。8M的Ghrelin呈时间和剂量依赖性抑制ALP活性和RANKI，表达。结论：成功分离了小鼠原代VSMCs，并构建VSMCs向成骨样细胞分化的体外细胞模型；Ghrelin抑制VSMCs向成骨样细胞分化，并下调RANKI，的表达。关键词：Ghrelin；血管平滑肌细胞；p．甘油磷酸钠；核因子KB受体活化因子配体；凤mt相关转录因子2；碱性磷酸酶第二章融ⅢKL介导Gllrelin抑

7、制小鼠血管平滑肌细胞的成骨样分化目的：探讨RANKI，在Ghrelin抑制小鼠VSMCs成骨样分化中的作用。方法：构建RANKI，过表达质粒，以RANKI，过表达质粒转染小鼠VSMCs，使用Ghrelin干预过表达RANKI，的小鼠VSMCs。荧光定量PCR检测RANKI，、Runx2删刚A的表达，ALP试剂盒检测ALP活性。结果：(1)RANKI，过表达质粒可显著增加RANKI，的表达；(2)RANKI，过表达后，Ghrelin抑制ALP活性和RullX2表达的作用消失，说明RANKL阻断