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时间:2019-05-15
《Ghrelin抑制大鼠心梗后心肌纤维化的作用及机制研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、Ghrelin抑制大鼠心梗后心肌纤维化的作用及机制研宄TheeffectsandmechanismofGhrelinonmyocardialfibrosisinmyocardialinfarctionrat作者姓名:王茜专业名称:内科学研宄方向:冠心病与心衰的机制研宄与治疗指导教师:杨萍教授学位类别:医学博士培养单位:吉林大学中日联谊医院论文答辩日期:2018年11月28日授予学位日期:年月曰答辩委员会组成:姓名职称工作单位主席马庆杰教授
2、吉林大学中日联谊医院委员张月兰教授中国医科大学附属第一医院尹新华教授哈尔滨医科大学附属第一医院周余来教授吉林大学药学院贺玉泉教授吉林大学中日联谊医院未经本论文作者的书面授权,依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人,均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用(但纯学术性使用不在此限)。否则,应承担侵权的法律责任。博士学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交学位论文,是本人在指导教师的指导下,
3、独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名??三吉曰期:IU年丨L月1日中文摘要Ghrelin抑制大鼠心梗后心肌纤维化的作用及机制研究目的:探讨早期应用Ghrelin是否能减轻大鼠心梗后心肌纤维化的程度及相关机制。方法:结扎SD大鼠左冠状动脉前降支(Leftanteriordescendingartery
4、,LAD)4周建立大鼠心肌梗死模型,假手术组只穿线但不结扎。手术后,把生存的大鼠随机分为假手术组、心梗组、心梗+Ghrelin组及假手术+Ghrelin组。心梗+Ghrelin组及假手术+Ghrelin组大鼠在手术当天皮下注射Ghrelin(100µg/kg),每天2次,注射共持续4周;假手术组及心梗组按同样方式皮下注射等量的生理盐水。4周后血流动力学检测HR,LVEDP,dp/dtmax及dp/dtmin变化情况。然后麻醉后处死大鼠,取出心脏,用Masson染色法观察心肌纤维化程度;采用实时定量PCR法检测左室非梗死区心
5、肌组织collgenI/III,CTGFmRNA的表达;Westernblot法检测心梗大鼠心肌NADPHoxidase,SGK1,MMP-2/9,Nrf2及HO-1蛋白表达。在体外试验中,选择大鼠心肌成纤维细胞,用AngII诱导心肌成纤维细胞并给予Ghrelin预处理,用CCK-8法检测大鼠心肌成纤维细胞的增殖;transwell小室检测心肌成纤维细胞迁徙;用光泽精化学发光法检测NADPHoxidase的活性;用DCFH-DA法及流式细胞术检测ROS的水平;Westernblot法检测SGK1,CTGF,MMP-2/9,
6、collagenI/III,Nrf2及HO-1蛋白的表达。结果:1.动物实验研究表明,与假手术组相比,心梗组大鼠心肌间质与血管周围胶原沉积明显增多。羟脯胺酸含量及胶原I/IIImRNA也明显增加。Ghrelin处理组心肌胶原沉积、羟脯胺酸含量及胶原I/IIImRNA明显降低。2.与假手术组相比,心梗大鼠心肌NADPHoxidase,SGK1,CTGF表达,ROS及MDA含量明显升高,而Nrf2表达下降;心梗+Ghrelin组心肌NADPHIoxidase,SGK1,CTGF表达,ROS及MDA含量较心梗组明显降低,而Nrf
7、2,HO-1表达升高。3.在体外试验中,与对照组相比,AngII刺激组心肌成纤维细胞增殖及迁移明显增加,而AngII+Ghrelin组心肌成纤维细胞增殖及迁移较AngII组明显降低。4.与对照组相比,AngII组大鼠心肌成纤维细胞SGK1,CTGF,MMP-2/9,collagenI/III及NADPHoxidase,ROS明显增加而Nrf2表达明显降低;与AngII组相比,AngII+Ghrelin组SGK1,CTGF,MMP-2/9,collagenI/III,NADPHoxidase,ROS降低,而Nrf2,HO-1
8、表达明显升高。特异性阻止NADPHoxidase及ROS降低SGK1,CTGF,MMP-2/9,collagenI/III表达。5.与AngII刺激正常的心肌成纤维细胞相比,AngII刺激基因沉默SGK1的心肌成纤维细胞CTGF表达明显降低,而非靶向阴性对照组与未转染的细胞中CTGF无明显变化。结论:1
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