Ghrelin抑制大鼠心梗后心肌纤维化的作用及机制研究

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1、Ｇｈｒｅｌｉｎ抑制大鼠心梗后心肌纤维化的作用及机制研宄ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＧｈｒｅｌｉｎｏｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｆｉｂｒｏｓｉｓｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎｒａｔ作者姓名：王茜专业名称：内科学研宄方向：冠心病与心衰的机制研宄与治疗指导教师：杨萍教授学位类别：医学博士培养单位：吉林大学中日联谊医院论文答辩日期：２０１８年１１月２８日授予学位日期：年月曰答辩委员会组成：姓名职称工作单位主席马庆杰教授

2、吉林大学中日联谊医院委员张月兰教授中国医科大学附属第一医院尹新华教授哈尔滨医科大学附属第一医院周余来教授吉林大学药学院贺玉泉教授吉林大学中日联谊医院未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。博士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，

3、独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名？？三吉曰期：ＩＵ年丨Ｌ月１日中文摘要Ghrelin抑制大鼠心梗后心肌纤维化的作用及机制研究目的：探讨早期应用Ghrelin是否能减轻大鼠心梗后心肌纤维化的程度及相关机制。方法：结扎SD大鼠左冠状动脉前降支(Leftanteriordescendingartery

4、,LAD)4周建立大鼠心肌梗死模型，假手术组只穿线但不结扎。手术后，把生存的大鼠随机分为假手术组、心梗组、心梗+Ghrelin组及假手术+Ghrelin组。心梗+Ghrelin组及假手术+Ghrelin组大鼠在手术当天皮下注射Ghrelin（100µg/kg），每天2次，注射共持续4周；假手术组及心梗组按同样方式皮下注射等量的生理盐水。4周后血流动力学检测HR，LVEDP，dp/dtmax及dp/dtmin变化情况。然后麻醉后处死大鼠，取出心脏，用Masson染色法观察心肌纤维化程度；采用实时定量PCR法检测左室非梗死区心

5、肌组织collgenI/III，CTGFmRNA的表达；Westernblot法检测心梗大鼠心肌NADPHoxidase，SGK1，MMP-2/9,Nrf2及HO-1蛋白表达。在体外试验中，选择大鼠心肌成纤维细胞，用AngII诱导心肌成纤维细胞并给予Ghrelin预处理，用CCK-8法检测大鼠心肌成纤维细胞的增殖；transwell小室检测心肌成纤维细胞迁徙；用光泽精化学发光法检测NADPHoxidase的活性；用DCFH-DA法及流式细胞术检测ROS的水平；Westernblot法检测SGK1，CTGF，MMP-2/9，

6、collagenI/III，Nrf2及HO-1蛋白的表达。结果：1.动物实验研究表明，与假手术组相比，心梗组大鼠心肌间质与血管周围胶原沉积明显增多。羟脯胺酸含量及胶原I/IIImRNA也明显增加。Ghrelin处理组心肌胶原沉积、羟脯胺酸含量及胶原I/IIImRNA明显降低。2.与假手术组相比，心梗大鼠心肌NADPHoxidase，SGK1，CTGF表达，ROS及MDA含量明显升高，而Nrf2表达下降；心梗+Ghrelin组心肌NADPHIoxidase，SGK1，CTGF表达，ROS及MDA含量较心梗组明显降低，而Nrf

7、2，HO-1表达升高。3.在体外试验中，与对照组相比，AngII刺激组心肌成纤维细胞增殖及迁移明显增加，而AngII+Ghrelin组心肌成纤维细胞增殖及迁移较AngII组明显降低。4.与对照组相比，AngII组大鼠心肌成纤维细胞SGK1，CTGF，MMP-2/9，collagenI/III及NADPHoxidase，ROS明显增加而Nrf2表达明显降低；与AngII组相比，AngII+Ghrelin组SGK1，CTGF，MMP-2/9，collagenI/III，NADPHoxidase，ROS降低，而Nrf2，HO-1

8、表达明显升高。特异性阻止NADPHoxidase及ROS降低SGK1，CTGF，MMP-2/9，collagenI/III表达。5.与AngII刺激正常的心肌成纤维细胞相比，AngII刺激基因沉默SGK1的心肌成纤维细胞CTGF表达明显降低，而非靶向阴性对照组与未转染的细胞中CTGF无明显变化。结论：1