Diazinon抑制PI3K-AKT通路损伤猪卵巢颗粒细胞的研究

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1、分类号密级UDC单位代码10435硕士学位论文Diazinon抑制PI3K-AKT通路损伤猪卵巢颗粒细胞的研究DiazinonimpairsporcineovariangranulosacellsbyinhitbitingPI3K-AKTpathway研究生姓名：王玮指导老师：尹珅教授学科专业：动物物遗传育种与繁殖研究方向：动物生殖发育与基因工程中国·青岛二〇一八年六月DiazinonimpairsporcineovariangranulosacellsbyinhitbitingPI3K-AKTpathwayThesiss

2、ubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyWeiWang（CollegeofAnimalScienceandTechnology）Supervisor:Prof.ShenYinQingdao.ChinaJune,2018独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表

3、或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师

4、签名：时间：年月日青岛农业大学硕士学位论文摘要Diazinon抑制PI3K-AKT通路损伤猪卵巢颗粒细胞的研究摘要二嗪农(diazinon，DZN)属于广谱有机磷杀虫剂，在农业生产中广泛使用，但DZN的滥用已对环境造成污染，在饲料、饮水及土壤中均能检测到DZN残留。然而对DZN的生殖毒性研究较少，因此我们从猪卵巢颗粒细胞入手，研究DZN暴露对颗粒细胞增殖的影响及分子机制。实验结果表明，DZN暴露对猪颗粒细胞毒性随浓度增加而增大，并导致p-PI3K,p-PTEN和p-AKT等蛋白磷酸化水平降低，表明PI3K-AKT通路活性受

5、到抑制。我们也发现细胞内活性氧水平升高，抗氧化CAT蛋白含量增加，和抗氧化酶相关基因CAT，SOD2，PRDX6和GPX1的mRNA含量增加，都证明DZN会诱导颗粒细胞氧化应激和ROS的产生。为了进一步探究其毒理机制，我们对颗粒细胞攻毒后做RNA-seq检测，分析相关差异基因。对氧化应激和ROS差异基因应用STRING数据库进行蛋白互作分析发现TP53,PRDX6,CAT,HIF1A，FOXO3等可能发挥关键作用。随着DZN浓度升高细胞凋亡水平上升，凋亡相关基因BAX,BCL-2,BCL-2/BAX,CASP9和CASP3

6、的mRNA含量增加；也发现自噬相关基因mTOR，ATG7和LAMP2的mRNA含量上调，表明细胞发生凋亡和自噬。对自噬和凋亡的104个差异基因用STRING数据库分析，发现TP53、AKT、PTEN和BAK等蛋白发挥重要作用。并且，DNA损伤同源修复相关基因CHEK1、RAD51和BRCA1的mRNA表达上调，表明DZN暴露导致DNA双链损伤。并且DZN暴露后CYP19A1蛋白含量下降，表明DZN会影响雌激素合成和卵泡发育。总之，DZN暴露导致猪卵巢颗粒细胞ROS积累，DNA损伤，抑制PI3K-AKT通路活性，导致细胞凋亡

7、和自噬，并且可能会影响雌激素的合成及卵泡发育。关键词：猪卵巢颗粒细胞；PI3K-AKT通路；转录组分析I青岛农业大学硕士学位论文AbstractDiazinonimpairsporcineovariangranulosacellsbyinhitbitingPI3K-AKTpathwayAbstractDiazinon(DZN)isabroad-spectrumorganophosphorusinsecticidewhichiswidelyusedincroppests.Duetoitsoveruse,DZNhascause

8、denvironmentalpollution,evidencedbythatDZNresiduesweredetectedinfeed,drinkingwaterandsoil.However,littleisknownaboutDZNreproductivetoxicity.Therefore,we