抑制pi3k-akt通路提高hela细胞化疗效果的实验研究论文

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1、抑制PI3K/Akt通路提高HeLa细胞化疗效果的实验研究论文【摘要】目的探讨抑制PI3K/Akt信号转导通路提高抗癌药物对人宫颈癌HeLa细胞的杀伤作用。方法采用MTT法检测Celecoxib、DDP及Docetaxel单独或联合PI3K抑制剂LY294002对人宫颈癌HeLa细胞的抑制率；采用流式细胞技术检测药物单独或联合作用对HeLa细胞凋亡的影响。结果（1）联合LY294002能够显著提高Celecoxib、DDP及Docetaxel对HeLa细胞抑制率；（2）LY294002与Celecoxib、DDP及Docetaxel的协同治疗指数均小于1，二者起协同

2、治疗作用；（3）联合LY294002能够增加HeLa细胞的凋亡水平。结论抑制PI3K/Akt信号转导通路能够显著提高Celecoxib、DDP及Docetaxel对HeLa细胞杀伤作用。【关键词】PI3K/Akt协同治疗指数细胞凋亡0引言近年的研究表明，磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol3kinases，PI3K）在肿瘤信号转导中起着重要的调节作用。细胞在一系列内外因素的作用下，通过启动PI3K/Akt信号转导通路，诱导细胞的增殖、分化，避免细胞发生凋亡。在肿瘤细胞逃避抗癌药物的杀伤过程中，PI3K/Akt信号转导通路可能起了极其重要的

3、作用.freell，Celecoxib的终浓度为80，100，120，140，160μmol/L，Docetaxel的终浓度为0.1，0.5，1，5，10μg/ml。两药合用（DDP+LY294002，Celecoxib+LY294002，Docetaxel+LY294002）药物浓度采用1∶1方案。设空白孔对照，给药后继续置于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养24h，每孔加入MTT溶液（5mg/ml）20μl培养4h，彻底吸去培养液，加入二甲基亚砜150μl/孔，震荡10min，酶标仪492nm激光检测吸光度。计算细胞抑制率（抑制率=1－加药物孔的吸光度值/未

4、加药物孔的吸光度值×100%）。实验重复3次。1.4结果判定根据周廷潮等［1］药物效应中效方程式fa/fu=(D/Dm)m，进行中效作图y=logfa/fu，x=logD，y=ax+b（fa为效应，fa=抑制率，fu为1fa，D为药物浓度，Dm为中效剂量，即0.5效应时的药物浓度，m为斜率)。计算两药单用及合用时的中效浓度（IC50）。然后根据公式计算合用指数（binationindex，CI）CI=(D)1/(DX)1+(D)2/(DX)2+α〔(D)1(D)2〕/〔(DX)1(DX)2〕，(D)1、(D)2为联合用药达到某一效应时药物1和药物2的浓度，(DX)

5、1、(DX)2为单独用药达到某一效应时药物1和药物2的浓度，α=1为两种相互非排斥性药物，α=0为两种相互排斥性药物。CI＜1协同，CI=1相加，CI＞1拮抗。1.5细胞凋亡检测分别Celecoxib80μmol/L，DDP10μg/μl，Docetaxel1μg/μl，LY29400220μM单独及两药联合（Celecoxib80μmol/L+LY29400220μM，DDP10μg/ml+LY29400220μM，Docetaxel1μg/ml+LY29400220μM）作用细胞24h后，制成细胞悬液1000r/min离心5min收集细胞，0.01mol/lPB

6、S液冲洗2次，用20℃80%乙醇固定细胞，细胞悬液1000r/min离心5min，去掉乙醇固定液，PBS液洗涤2次，调整细胞浓度为5×105/ml，加入PI染液1ml（50μg/mlPI，100μg/mlRNase，0.1%Triton100），4℃孵育60min，200目钢筛过滤，流式细胞术分析细胞周期和凋亡。2结果2.1单药及两药合用细胞抑制率改变表1HeLa细胞药物单独及联合作用对细胞半数抑制浓度的影响（略）联合用药组LY294002联合Celecoxib、DDP及Docetaxel的半数细胞抑制浓度（IC50）均显著高于单独用药组，差异具有统计学意义（P

7、＜0.05）。所有联合用药组CI均1，说明LY294002与Celecoxib、DDP及Docetaxel起协同作用，见表1。2.2单药及两药合用细胞对细胞凋亡的影响联合用药组LY294002联合Celecoxib、DDP及Docetaxel引起的细胞凋亡改变均显著高于单独用药组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。其中LY294002联合Celecoxib、DDP能够显著引起人宫颈癌HeLa细胞凋亡，见表1、图1。图1HeLa细胞抗肿瘤药物单独和与LY294002联合应用细胞凋亡变化（略）A：单独应用DDP作用；B：DDP与LY294002联合作用。M1细胞凋