铅诱导神经胶质细胞炎性因子cox-2表达的分子机制研究

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1、万方数据温州医科大学硕士学位论文论文题目：答辩委员会成员：万方数据目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5第一部分材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7第二部分结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20第三部分分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39综述参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48万方数据温州医科大学硕士学位论文中英文缩略词对照表英文缩写英文全称中文名ddItz0Doubledistilledwater双蒸水CoX．2Cyclooxygenase-2环氧化物酶2DNADesoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸DNAEDTAEthylenedinitrolotetraaceticacid四乙酸乙二胺DTTDithiothreitol二硫苏糖醇FBSFetalbovineserum小胎牛血清HisHiston组氨酸SDSSodiumdodecylsulfate

3、十二烷基硫酸钠IFNInterferon干扰素KDkiloDolton千道尔顿LBLufiaBertaninbrothLB细菌培养基BSABovineSerumAlbumin牛血清白蛋白AAarachidonicacid花生四烯酸PBSPhosphatebuffersaline磷酸缓冲盐溶液PVDFPolyvinylidenefluoride聚偏二氟乙烯膜RPMRevolutionsPerMinure辕

4、食RT．PCRReversetranscriptionpolymerasechain逆转录聚合酶链式反应reactionTEMEDTetramethylethylene

5、diamine四甲基乙二胺TNFTumornecrosisfactor肿瘤坏死因子II-ME13-MercaptoethanolB-巯基乙醇plMicroliter微升WBWestemblot蛋白质印迹Lliter升hHour小时mInMinute分钟mlMilliliter毫升万方数据温州医科大学硕士学位论文铅诱导神经胶质细胞炎性因子COX。2表达的分子机制研究中文摘要目的：1．用蛋白免疫印迹研究铅暴露条件下，几种常用的脑细胞系炎性因子环氧化酶2(COX．2)的变化情况。2．阐明铅诱导胶质细胞COX．2表达的分子机制。3．揭示铅诱导胶质细胞COX．2表达介导的生物学功

6、能，为指导临床铅对神经系统损伤等相关疾病用药提供理论依据。方法：1．对BV-2、C6、PCI2和RBE4细胞株进行不同浓度及不同时间的醋酸铅处理，采用Westernblot(蛋白免疫印迹)来检测细胞内蛋白的表达变化。2．提取细胞的总RNA并逆转录，进行PCR检测COX一2信使RNA的表达变化情况。3．向C6细胞转染COX一2启动子报告基因(COX．2promoterluciferse)，得到稳定转染细胞株后，用醋酸铅刺激该细胞，并检测其荧光素酶值的变化情况，来反映COX一2启动子的活性。4．向C6细胞转染带有荧光素酶的转录因子质粒(NFATluciferse、NFKBl

7、uciferse、AP．1luciferse)，并得到稳定转染的细胞株。用醋酸铅对稳定转染的细胞株进行不同浓度和不同时间的刺激，采用荧光素酶报告系统检测相对应的转录因子的活性变化情况。5．向C6细胞转染导致NFAT功能突变的质粒(cox．2luxciferseNFATmut)，以确定在NFAT功能受抑制后在不同时间及不同浓度铅处理之下，相对应的荧光素酶活性变化情况，以检测NFAT在铅诱导COX一2转录活性过程中所起的作用。争±甲：日木：1．用不同浓度剂量依赖及不同时间依赖的铅刺激BV-2、C6、PCI2和RBE4细胞株，发现COX．2在胶质细胞BV-2和胶质瘤细胞C6中

8、表达升高，但在RBE4和类神经元细胞PCI2中表达并不明显。2．PCR的结果表明：259M的铅处理24小时即可使BV-2和C6细胞cox-2信使万方数据温,kl怄；科大学硕士学位论文RNA有明显的诱导表达，且随着铅刺激浓度增加COX一2信使RNA表达增加；在不同时间点用50“M的铅分别刺激BV．2和C6细胞，发现随着铅刺激的时间增加，COX．2信使RNA表达较阴性对照有明显增加，并且呈依次增加的趋势。3．向C6细胞转染cox-2启动子报告基因，并对稳定转染的细胞株进行铅刺激。结果显示，40州铅处理12小时后COX一2启动子转录活性较阴性对