mpp+通过mtor信号通路下调pc12细胞的自噬活性

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1、硕士学位论文论文题目MPP+通过mTOR信号通路下调PC12细胞的自噬活性研究生姓名杜建红指导教师姓名张正春专业名称神经病学研究方向脑血管病基础与临床论文提交日期2013年5月MPP+通过mTOR信号通路下调PC12细胞的自噬活性中文摘要+MPP通过mTOR信号通路下调PC12细胞的自噬活性中文摘要目的：+1.观察不同浓度及不同时间点的MPP对PC12细胞的存活率的影响，确定PD（Parkinson’sdisease）细胞模型的合适浓度及时间范围；+2.观察MPP对PC12细胞的存活率、LDH漏出率及自噬-溶酶体途径相关蛋白LC3-II、Beclin1的表达水平的影响，并观察雷

2、帕霉素(Rapamycin，RAPA)的拮抗作用；+3.观察MPP对自噬上游调控蛋白mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶蛋白）及其信号通路相关蛋白的表达水平影响，并观察RAPA的作用。方法：++根据不同浓度及作用不同时间MPP对PC12细胞活性的影响，选择合适的MPP+处理浓度及时间，利用PC12细胞经过MPP处理制作帕金森模型，再给予RAPA进行干预：MTT法检测细胞存活率，LDH试剂盒检测上清液中的LDH活性，Westernblot技术分析LC3-II、Beclin1、mTOR、Raptor、Rictor、p-p70s6k、p-4E-BP1蛋白表达水+平的变化，探讨MPP调节PC1

3、2细胞自噬活性的机制。结果：++1.PC12细胞相对存活率随MPP浓度梯度呈降低趋势，MPP浓度在0.25～3.0mM+范围内细胞相对存活率显著下降（P<0.05～0.001）；PC12细胞相对存活率随MPP时间梯度呈降低趋势，在8～48h范围内细胞相对存活率显著下降（P<0.05～0.001）；+2.MPP处理PC12细胞24h，细胞相对存活率显著降低（P<0.001），上清液中LDH漏出率显著升高（P<0.001），LC3-II的表达显著受抑（P<0.01），Beclin1的表达显著受抑（P<0.01），RAPA干预后有效提高了细胞相对存活率（P<0.001），降低上清液中

4、LDH活力（P<0.001），显著上调了LC3-II的表达（P<0.01）和Beclin1的表达（P<0.01）；+3.MPP处理PC12细胞24h，显著上调了mTOR信号通路相关蛋白的表达，RAPA干预后下调mTOR信号通路。I中文摘要MPP+通过mTOR信号通路下调PC12细胞的自噬活性结论：+1.MPP可以通过下调PC12细胞的自噬活性导致细胞损伤，RAPA表现出拮抗作用。+2.MPP可能是通过激活mTOR信号通路下调PC12细胞的自噬活性，RAPA能抑制mTOR信号通路促进自噬，从而对PC12细胞起到保护作用。关键词：mTOR；自噬；PC12细胞；雷帕霉素；帕金森病作者

5、：杜建红指导老师：张正春IIMPP+通过mTOR信号通路下调PC12细胞的自噬活性英文摘要+MPPdown-regulatesactivationofAutophagyinthePDcellmodelpossiblyviamTORPathwayAbstractObjective+1.ToobservetheinfluenceofdifferentconcentrationsofMPPanddifferenttimepointsonthesurvivalrateofPC12cells,andsearchingforappropriaterangeofconcentrationan

6、dtimeforcellularmodelofParkinson'sdiseases;+2.ToobservetheinfluenceofMPPonPC12cellssurvivalrate、LDHleakagerateandtheexpressionlevelofLC3-II,Beclin1involvinginautophagy-lysosomalpathway,and+viewthephenomenonofRAPAprotectedPC12cellsagainstMPP-inducedinjury;+3.ToobservetheinfluenceofMPPonPC12th

7、eexpressionlevelofmTOR(mammalsrapamycintargetprotein)andotherrelatedproteininitssignalingpathway,andviewtheeffectofRAPA.Methods+SelecttheappropriateconcentrationandtreattimeofMPP,accordingtotheeffectof+differentconcentrationandtimeofMPPonPC12cellac