洋地黄类药物诱导肿瘤细胞自噬及相关激酶信号通路的研究

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1、硕士学位论文学校代码：10023学号：S2011010014洋地黄类药物诱导肿瘤细胞自噬及相关激酶信号通路的研究StUdyonaUtOphagyandreIatedSigna¨ngpathwaySindUCedbydigita¨SdrUgS所院：姓名：指导教师：学科方向：研究方向：完成日期：医药生物技术研究所占跃晨王真教授微生物与生化药学白噬与肿瘤分子药理2014年5月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学

2、位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者虢奶礅签字吼加，旺年易月6日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解jE塞终塑医堂院有关保存、使用学位论文的管理办法。有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权j丝塞坯塑医堂瞳可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：毒霭采羝导师签名：签字日期：沪I眵年占月6同学位论文作者毕业后去

3、向：工作单位：通讯地址：签字日期：训秘年6，电话：邮编：f月∈)日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．191哇巴因对不同细胞增殖活力及克隆形成能力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．

4、191．1哇巴因对不同细胞增殖活力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．191．2哇巴因对不同细胞克隆形成能力的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯202哇巴因诱导肿瘤细胞自噬的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．212．1吖啶橙染色定性和定量检测自噬发生⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．212．2洋地黄类药物对自噬相关蛋白的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．222．3免疫荧光检测LC3表达和分布的变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．243药物诱导的自噬表型与ROS水平的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．253．1哇巴因对细胞内ROS水平的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．253．2ROS与药物诱导自

5、噬表型的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯263．3SrC激酶与药物诱导ROS生成的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯274洋地黄类药物对自噬相关激酶信号通路的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯284．1药物作用对AMPK、NKA／Src／ERKl，2及PERK，eIF2a信号通路的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯284．2AMPK体外活性实验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．304．3哇巴因对细胞内ATP水平的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯315Src激酶在药物诱导自噬过程的作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯325．1PP2或siR

6、NA．Src对ERKl／2和LC3．I

7、表达的影响⋯⋯⋯⋯⋯．．325．2PP2对药物的细胞毒作用的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯335．3siRNA_Src对药物诱导自噬及细胞毒作用的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯346AMPK与Src信号通路之间的关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．356．1AICAR、CompoundC及PP2对各激酶磷酸化水平的影响⋯⋯⋯366．2化学抑制剂及siRNA对各激酶活性的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．366．3AMPK与Src通路之间的交叉调节关系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．387洋地黄类药物诱导自噬的信号通路图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3

8、9讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．41参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44论文结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．63附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．65致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．70北京协和医学院硕上学位论文中文摘要洋地黄类药物(Dig妇¨s)是一种细胞内Na+，K

9、+一ATPase的特异性配体，临床上广泛用于心力衰竭