小分子化合物木脂素vb6通过激活jnk信号通路诱导肿瘤细胞凋亡和自噬的机制研究

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1、浙江大学硕士学位论文小分子化合物木脂素VB6通过激活JNK信号通路诱导肿瘤细胞凋亡和自噬的机制研究姓名：胡会永申请学位级别：硕士专业：肿瘤学指导教师：陈益定20120529浙江大学硕士学位论文中文摘要小分子化合物木脂素VB6通过激活州K信号通路诱导肿瘤细胞凋亡和自噬的机制研究浙江大学医学院硕士研究生导师中文摘要肿瘤学胡会永陈益定【研究背景】恶性肿瘤的发病率越来越高，且涉及机体各个系统，成为危害人类健康的常见病。目前，恶性肿瘤的治疗仍然以手术治疗为主，辅以化疗、放疗、生物治疗的综合性治疗．近年来在肿瘤手术及放化疗不断发展的

2、同时，分子靶向治疗，肿瘤免疫治疗也飞速发展。随着临床治疗的多元化，肿瘤患者的临床获益得到改善，生存时间明显延长．但是，在化疗的过程中有相当部分患者因为对化疗药物耐药或者难以耐受药物的毒副反应而不能维持长期缓解，寻求高效低毒的药物仍是肿瘤治疗研究的一个重要方向．黄荆子乙酸乙酯提取物(Evn．50)来源于黄荆子(F硼ctuSⅥticisNegulldo)，其为马鞭草科牡荆属植物黄荆mtexneg吼doL．)的果实，黄荆子性温，味苦，具有除痰，行气，止痛，退热，治疗咳嗽，哮喘的功能，中医主要用于治疗慢性支气管炎，对咳，痰，喘有

3、明显疗效【¨．EVll．50是黄荆子的主要毒性成分，属于新木脂素类化合物，同其他植物类木脂素化合相比，不需经过肠道细菌转化成动物木脂素肠内酯、肠二醇．本课题组前期对EⅦ．50抗恶性肿瘤的作用进行了较系统的体外和体内的试验研究，体外研究发现Evll．50具有较广谱的抗恶性肿瘤作用，在体外对多种恶性肿瘤细胞系诸如MCF7、ZR．75．1、MDA·MB-435S、MDA．Ⅷ．23l、LNCaP、PC．3、COCl细胞均有明显的增殖抑制作用，荷瘤裸鼠模型的研究也表明，EⅦ．50Il浙江大学硕士学位论文中文摘要同样具有显著的抑制乳

4、腺癌，前列腺癌，肝癌模型和子宫颈癌生长的作用．研究发现EⅦ．50通过显著上调BaX／Bcl．2的比值，促进Ba)(的表达，抑制Bcl．2的表达而诱导细胞发生凋亡．上述实验结果提示，天然小分子化合物EⅦ．50对多种恶性细胞具有明确的诱导凋亡作用．VB6又名6．羟基-4．(4．羟基．3．甲氧基苯基)3．羟甲基．7．甲氧基．3，4．二氢(3R，4S)．2．醛基萘，是从EⅦ．50化合物中分离纯化出来的单体分子．本课题组继续对VB6进行抗肿瘤活性研究，探讨VB6体外体内抗肿瘤作用及其可能机制，进一步从分子水平明确VB6对肿瘤相关信

5、号通路的影响，为后续新型抗肿瘤药物的研发奠定实验基础．【研究目的】筛选敏感细胞株，研究VB6在体外对肿瘤细胞的增殖抑制及促进凋亡、自噬作用，并探讨其分子机制，明确其诱导肿瘤细胞发生凋亡、自噬的信号转导途径．同时建立大肠癌细胞株RKO裸鼠荷瘤模型，研究VB6的体内抗肿瘤作用．【研究方法】1．倒置显微镜观察VB6处理MCF．7、RKO细胞后的形态学改变；2．采用MTT法测定VB6对不同细胞株的生长抑制率，筛选敏感细胞株；3．透射电镜观察VB6处理McF．7、RKO细胞后细胞凋亡，自噬形态改变；4．流式细胞仪分析凋亡细胞百分比

6、及细胞周期改变；5．westemBlot法检测VB6处理MCF．7、RKO细胞后ⅢK、p．刷K、c．JuIl、p．c．Jun、Bcl．2、B戤、p．Bcl．2、C2Lsp弱e．3、PARP、Beclin．1、LC3B的表达变化；6．Ba】b尼．nu雌性裸鼠荷瘤，腹腔给药观察VB6的体内抗肿瘤作用．【研究结果】1．VB6对MCF．7和lⅨO细胞增殖抑制效果随着药物作用时间延长和浓度增加而加强HI浙江大学硕士学位论文中文摘要应用倒置显微镜观察VB6对MCF．7和I水O细胞增殖的影响，经过5州VB6作用不同时间后，两株细胞均可

7、见细胞质减少，细胞体缩小，多数细胞由多边形变成椭圆形或者圆形，细胞伸展不良，逐渐与周围的细胞脱离，还有明显的空泡化，出现大量的细胞碎片，且形态改变随作用时间的延长而交得明显，不同浓度VB6对MCF．7和IⅨO细胞分别作用24、12小时后发现两株细胞产生同样的形态改变，高浓度更明显．结果表明VB6对McF．7和IⅨO细胞增殖都有较好的抑制作用，并且抑制效果表现出时间和浓度依赖性．2．不同类型的细胞株对VB6的敏感性不同人乳腺癌MCF．7细胞株IC50为1．46斗M，人白血病K562细胞株IC50为1．32肛M，人大肠癌RK

8、O、SW480、SW620细胞株IC50分别为2．85州、4．2

9、IM、3．36州，人膀胱癌HTB．95637、R1『4细胞株IC50分别为2．85肛M、3．92州，入骨肉瘤MG63细胞株IC50为2．01洲，人肺癌H1975细胞株IC50为4．24山，人肝癌H印G2细胞株IC50为12．37州，人胰腺癌P锄c．1细